【摘 要】
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目的:本研究基于人参总皂苷和人参提取物的提取及其化学成分分析鉴定,结合免疫相关小鼠体内药理实验的功效物质评价体系,分析比较人参总皂苷（TGS）和人参提取物（GE）对环磷酰胺（CP）诱导的免疫低下小鼠的防治作用。方法:1.使用Thermo Fisher Scientific Ulti Mate 3000 UHPLC+focus×2双梯度系统和CORTECS UPLC C18色谱柱（2.1 mm×10
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目的:本研究基于人参总皂苷和人参提取物的提取及其化学成分分析鉴定,结合免疫相关小鼠体内药理实验的功效物质评价体系,分析比较人参总皂苷（TGS）和人参提取物（GE）对环磷酰胺（CP）诱导的免疫低下小鼠的防治作用。方法:1.使用Thermo Fisher Scientific Ulti Mate 3000 UHPLC+focus×2双梯度系统和CORTECS UPLC C18色谱柱（2.1 mm×100 mm,1.6μm）检测TGS和GE中皂苷含量。单糖含量采用HPLC柱前衍生法测定。氨基酸含量采用氨基酸自动分析仪分析。2.将40只小鼠随机分为4组:对照组、模型组、TGS组和GE组。小鼠口服给药28天,造模4天（25、26、27和28天）。造模后,使用小鼠眼静脉丛血液检测血常规、造血相关细胞因子、血清生化指标和炎性细胞因子。取脾、胸腺进行脏器指标及组织病理学检测。通过检测脾细胞中T淋巴细胞、B淋巴细胞增殖情况,CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞数量。分析骨髓（BM）细胞凋亡、细胞周期及组织病理学变化。Western blot检测Bcl-xl、Blc-2、P53、Bax、Cyclin A和Cyclin D1蛋白的变化。检测心脏及肝脏线粒体功能、肝脏生化指标及制备病理学切片。3.从小鼠骨髓中提取分离造血干细胞（HSCs）并鉴定其纯度。将分选后的HSCs样品采用FITC标记Gr-1,PE标记TER-119、CD33,APC标记CD11b、CD41进行孵育,用流式细胞仪检测细胞中各抗体的表达。分析HSCs细胞凋亡、细胞周期。显微镜下观察集落形态。4.通过16S r DNA测序和生物信息学分析小鼠肠道菌群,以评估TGS和GE对CP诱导免疫低下小鼠肠道菌群失调有调节作用。结果:成分分析结果显示,TGS和GE的12种人参皂苷总含量差异明显,分别为67.21%和2.04%;TGS中17种氨基酸总含量（1.41%）低于GE（5.36%）;10种单糖的总含量为TGS（74.12%）和GE（76.36%）相似。动物实验结果表明,TGS和GE均可通过改善骨髓的组织病理状态,提高血细胞参数、血清生化指标、造血相关细胞因子和抗炎因子,抑制骨髓细胞凋亡,改善骨髓S期阻滞来保护骨髓的造血功能。TGS和GE可促进脾淋巴细胞(包括T和B淋巴细胞增殖,CD4+和CD8+T淋巴细胞,CD19+B淋巴细胞);抑制心肌线粒体膜电位和活性氧降低,升高模型小鼠的体重和器官指数、肝脏线粒体复合物Ⅰ-Ⅴ和肝脏氧化还原相关酶活力。HSCs分化结果显示,CP显著抑制HSCs向CD11b+、CD41+、CD33+、Gr-1+和TER-119+细胞分化,TGS和GE均能明显预防和改善CP诱导的免疫抑制小鼠HSCs分化能力下降,且GE的作用优于TGS。从模型组集落细胞数的变化情况可以看出,CP抑制了骨髓的增殖分化,TGS和GE可维持其正常分化。TGS和GE明显改善CP引起的HSCS S期阻滞和凋亡,GE对HSCs的保护作用强于TGS。TGS和GE对乳酸菌、双歧杆菌、Lachnospiraceae、Eubacterium＿coprostanoligenes、Clostridiales的丰度有改善作用,能有效地恢复肠道免疫功能紊乱;特别地,在乳酸菌的相对丰度中,GE比TGS展现更好的保护作用。结论:1.TGS和GE中人参皂苷、单糖和氨基酸的组成和含量存在一定差异。2.TGS和GE均对CP诱导的免疫抑制小鼠的免疫功能有保护作用,在一些指标中,GE的防治效果优于TGS。3.TGS和GE均可预防CP诱导的小鼠HSCs损伤,且GE调控HSCs细胞周期的作用优于TGS。4.TGS和GE可通过调节肠道菌群缓解CP的副作用,推测GE由于多糖和皂苷的协同作用发挥更好的保护作用。
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