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目的:研究DNA甲基化在孕期B[a]P暴露引起子代学习记忆降低中的作用研究。方法:12周雌雄各60只SD(Sprague Dawley)大鼠1:1进行交配,怀孕母鼠随机分为5组(每组12只):分别为空白组,橄榄油组,10 mg/kg B[a]P、20 mg/kg B[a]P和40mg/kg B[a]P剂量组。在孕晚期第17、18、19天腹腔注射染毒,染毒体积为0.2m L/kg,空白组不做任何处理,橄榄油组仅注射橄榄油。用Western blot的方法检测DNMT3a和ARC各个时间段蛋白表达水平,免疫组化法检测子鼠PND14、PND45和PND75海马ARC蛋白表达水平以及从出生到成年早期不同时间段海马总5m C水平,用实时定量PCR法检测子鼠从出生到成年早期不同时间段海马DNMT1、DNMT3a、DNMT3b、ARC m RNA表达水平。结果:1、对PND1-PND75的子鼠海马DNMT1 m RNA水平进行检测,结果发现,在PND1,PND4,PND14,3个染毒组的DNMT1 m RNA表达量升高,但是只有在PND4和PND14时间段,40mg/kg组DNMT1 m RNA升高有统计学差异(P<0.05),而在其他时间段组间DNMT1 m RNA水平差异没有统计学意义,结果表明,孕晚期接触B[a]P后会导致子代SD大鼠出生早期DNMT1 m RNA表达水平的增高。2、对PND1-PND75的子鼠海马DNMT3a m RNA水平进行检测,结果发现,从出生到成年早期的各个时间段DNMT3a m RNA表达都明显升高。在PND1和PND14,与空白组和10mg/kg组对比,20mg/kg和40mg/kg B[a]P染毒组的DNMT3a m RNA表达量明显升高,且具有统计学差异(P<0.05),在PND4和PND45时间段,20mg/kg组与空白组对比明显升高(P<0.05),40mg/kg剂量组与空白组,10mg/kg和20mg/kg组对比DNMT3a m RNA水平明显升高,具有统计学差异(P<0.05)。而在PND75时间段,DNMT3a m RNA水平升高但未观察到明显差异。结果表明,孕期B[a]P暴露可能会引起子鼠出生早期到成年早期DNMT3a m RNA表达水平增高。3、对PND1-PND75的子鼠海马DNMT3b m RNA水平进行检测,结果发现,从出生到成年早期的各个时间段DNMT3b m RNA表达都升高,但是只有在PND45,40mg/kg组与空白组,10mg/kg和20mg/kg组对比有明显差异(P<0.05),其他时间段DNMT3b m RNA表达的升高均没有统计学上的差异。结果表明,孕期B[a]P暴露可能会引起子鼠DNMT3b m RNA表达水平增高。4、根据DNMT3a m RNA结果可以看出孕期B[a]P暴露对子鼠从出生早期到成年早期均有影响。所以我们用Western-blot方法检测DNMT3a的蛋白表达。结果显示,从出生到成年早期的不同时间段(PND1-PND75),孕晚期B[a]P暴露会引起子代SD大鼠海马DNMT3a蛋白表达降低,并具有剂量依赖性。与空白组对比,DNMT3a蛋白表达在20mg/kg和40mg/kg组显著降低(P<0.05),与10mg/kg组对比,PND75的40mg/kg组DNMT3a蛋白表达显著降低(P<0.05)。以上结果提示,孕期B[a]P暴露会引起子代SD大鼠海马DNMT3a蛋白表达降低。5、免疫组化方法检测海马5m C总水平,可以观察到总5m C水平随着染毒剂量的增加显著升高,尤其是在20mg/kg和40mg/kg组(P<0.05)。6、对PND1-PND75的子鼠海马ARC m RNA水平进行检测,从结果可以观察到,从出生到成年早期不同时间段ARC m RNA的水平明显下降,且呈剂量反应关系。在PND1,PND7时间段,与空白组对比,10mg/kg,20mg/kg,40mg/kg组的ARC m RNA水平均显著下降(P<0.05),在PND4,PND45和PND75,与空白组、10mg/kg和20mg/kg对比,40mg/kg组的ARC m RNA水平显著下降,具有统计学意义(P<0.05)。结果表明:孕期B[a]P暴露会引起子鼠出生到成年早期ARC m RNA表达水平下降。7、孕期B[a]P暴露会引起子代PND4-PND75大鼠海马ARC蛋白表达降低。在PND4,PND14和PND75,与空白组对比,10mg/kg,20mg/kg和40mg/kg组ARC蛋白表达明显降低(P<0.05),在PND7,10mg/kg组变化不明显,20mg/kg和40mg/kg组ARC蛋白表达与空白组相比降低有统计学意义(P<0.05),在PND45,只有40mg/kg组ARC蛋白表达明显降低(P<0.05),而在PND1,各组之间没有明显变化。8、免疫组化的方法检测PND14,PND45和PND75ARC蛋白在齿状回的分布及表达。从免疫组化的结果可以看出,ARC主要分布在胞浆中,且主要分布在海马的齿状回和CA1区。在PND14,PND45,PND75,ARC表达明显下降(P<0.05)。在PND14和PND75,与空白组,10mg/kg和20mg/kg组对比,40mg/kg组ARC明显下降,且具有统计学意义(P<0.05)。在PND45,与空白组对比,20mg/kg和40mg/kg组ARC蛋白明显减少(P<0.05)。在PND45和PND75的免疫组化图中可以明显观察到空白组和橄榄油组强阳性细胞表达,20mg/kg和40mg/kg组ARC强阳性细胞明显减少。结论:1、孕期B[a]P的暴露引起海马DNMTs m RNA水平升高。2、孕期B[a]P的暴露引起DNMT3a蛋白水平降低。3、孕期B[a]P的暴露引起海马总的DNA 5m C水平升高。4、孕期B[a]P的暴露引起海马区ARC表达下调。