在药品研发过程中,质量标准作为终点控制和药品的生产过程控制一起,为药品的安全、有效、质量可控提供了有力的保障。有关物质指的是药品中与主成份类似或者具有一定渊源关系的有机杂质,属于质量标准中的重要检项,是药品的关键质量属性之一,也是质量研究的重点和难点。绝大多数的有关物质检查使用的是反相高效液相色谱法,本文重点探讨的正是反相色谱体系下小分子药物有关物质检查的方法开发。目前国内企业中有关物质检查方法的开发,常见的问题是照搬已有标准中的方法直接验证而不考虑该标准是否适用于自身产品;参考文献或已有标准的方法进行简单的参数调整并未进行系统研究以致在增加新的杂质时无法高效分离,需要对方法进行大的调整甚至是从头再来;对方法的重现性不重视以至于在方法转移时失败;某些公司基于比较保守的申报策略,并不会对已有标准的方法进行较大的改动,而是常常舍弃一些无法分离的杂质,这与质量研究的目的相违背。色谱技术是一门实验性的科学,我们需要的是在现有条件下解决应用问题。本文主要基于目前国内常规试验条件,在理论和实际操作中进行总结,从应用的角度,以分离和重现作为方法开发的目标,对各杂质的色谱特性进行全面考察,尝试提出一套反相色谱体系下小分子药物有关物质检查系统开发的可操作流程。针对目前有关物质检查方法开发过程中存在的一些问题,本文针对性的提出了四个观点:差异是分离的突破口;分离仅仅才是开始;方法是开发而不是验证出来的;理想的方法应有很好的重现性。这些观点贯穿在本文描述的方法开发过程中。第一章前言部分主要讲述了有关物质的概念和重要性,探讨了国内有关物质检查方法开发的现状和问题,提出了贯穿本文方法开发过程的4个观点,讨论了本文研究的意义和内容。第二章讨论了色谱分离理论在实际中的应用,给出了诸多应用案例和注意事项。本章从理论联系实际出发,重点讨论了流动相pH值、色谱柱和流动相成分这三个最能影响杂质分布的色谱条件;其次对梯度、柱温,盐浓度等进行了探讨。强调了在分离的研究过程中,首先需要找到合适的分离条件,其次需要收集足够多的信息,重点关注有响应差异的杂质及其敏感条件的范围,掌握各个杂质的色谱分离特性。第三章是基于重现性的系统的方法优化。研发实验室开发出来的方法,很多需要转移到其他合作实验室,以及工厂的QC实验室,甚至是药检所,并将在整个药品生命周期中一直持续使用。因此,如何确保方法在不同时间,不同实验室的重现性,是一个非常重要的问题。本章从多个方面分析如何提高方法的重现性,并给出了多个具体可行的操作方案。本阶段需要考察影响到方法重现性的各个因素,提高其容错能力,是一个精心打磨的过程。本章末尾,作者创新性的给出了一份有关物质检查方法系统开发的清单,用做实际工作中的参考。第四章是第二章所述内容的应用研究,描述了某呼吸系统原料药10个杂质分离的开发过程。首先通过流动相pH值筛选和色谱柱筛选确定了关键的色谱参数,并对稀释剂进行了考察;然后优化了流动相组成和梯度,解决了基线干扰的问题;再对柱温进行优化;之后通过破坏性试验确认了方法;进行了流动相的等比例转换,解决了流动相不能长时间使用的问题,并优化了基线;最后比较了自拟方法和药典已有方法,证明了自拟方法优于药典方法。第五章是第二、三章所述内容完整的应用研究,在第三章提及的方法开发清单的帮助下,对某降压原料药15个杂质的有关物质检查方法基于分离和重现性进行了全面的研究,并对整个研究过程各杂质的色谱特性进行了全面的列表汇总。在整个研究过程中,首先重点筛选了流动相pH值和色谱柱,优化了流动相成份和梯度,筛选了柱温,通过破坏性试验初步确认了方法;然后确认了波长,简化了流动相和pH值,优化了供试品的配制方法,考察了稀释剂的溶剂效应和稳定性,对色谱柱的批间差异和仪器间的差异进行了评估,以及对其他影响重现性的诸多细节问题进行了考察,最后完成了预验证,建立了本品的有关物质检查方法。本文所述的完整开发流程适用于原料药和制剂工艺研究的各个阶段,可根据需要选择部分开发,或进行系统完整的方法开发。梳理方法开发过程中的重点项,利用好方法开发清单,并及时总结各杂质的色谱特性,将在方法开发过程中达到事半功倍的效果。