【摘 要】
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该文以绿色木霉F为出发菌株,利用原生质体诱变技术筛选纤维素酶高产菌株,并对其产酶条件进行了优化.首先研究了绿色木霉F的原生质体制备和再生条件,制备绿色木霉F的原生质体
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该文以绿色木霉F<,264>为出发菌株,利用原生质体诱变技术筛选纤维素酶高产菌株,并对其产酶条件进行了优化.首先研究了绿色木霉F<,264>的原生质体制备和再生条件,制备绿色木霉F<,264>的原生质体应选用生长18-20h的菌丝,以0.2mol/L的磷酸缓冲液(pH5.8)为高渗缓冲系统,渗透压稳定剂选用0.6mol/L的氯化钠效果最佳.用溶菌酶:蜗牛酶=3:3(mg/ml)的混合酶,在32℃酶解3h.原生质体产量可达5.59×106个/mi.绿色木霉F<,264>原生质体再生应选择酶解2-3h的原生质体,以半固体木霉再生培养基为其再生培养基,其再生率在8.2％左右.经原生质体紫外诱变筛选到一株纤维素酶活较高的突变株F-UV<,264>,其滤纸酶活为15.78IU/g干料.突变株F-UV<,264>和出发菌株F<,264>的菌落形态基本相同,但两者的产孢时间明显不同,对其进行的拮抗试验和聚丙烯酰胺凝胶非变性电泳实验都表明两者是不同的菌株,证明绿色木霉F-UV<,264>为F<,264>的变异株.突变株能在发酵培养基上生长良好,其产纤维素酶能力为出发菌株的3倍,并且该菌株遗传稳定性好.对其性质研究表明该酶的作用最适温度为50℃,pH为5.0,底物量为60mg滤纸.F-UV<,264>产纤维素酶的热稳定性和pH稳定性均较好.培养基的组成、配比和培养条件等都会对绿色木霉F-UV<,264>产生的纤维素酶活产生一定的影响.该实验初步确定了绿色木霉F-UV<,264>的最适培养基起始pH为4.6-5.6;麸皮/稻草粉=1/3;固/液=1/4;并加入2%Mandels营养盐;30℃发酵96-135h可明显提高酶的产量,最终可使滤纸酶酶活提高到18.89IU/g干料.
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