研究背景和目的脂肪移植在临床已经开展100多年余,由于其优点较多,在临床得到了广泛的应用。随着乳腺癌发病率逐年增高,乳房重建的需求越来越大。皮瓣乳房重建创伤大,难以精确重建乳房的亚单位,而假体重建后期手感差,并发症发生率较高,这些因素使得越来越多的女性更愿意接受脂肪重建。目前脂肪移植已在临床取得一定的治疗效果,然而有一些问题亟待解决:1、体积保留率不稳定,往往需要多次手术才能完成满意的重建效果;2、移植后并发症发生率高。移植的脂肪大量坏死后形成的较大结节和钙化灶需要手术移除,这给患者带来困扰。有文献报道脂肪离心后根据密度的高低可以分为高密度脂肪(HDF)和低密度脂肪(LDF)。下层高密度脂肪含有较多的SVF细胞以及ECM成分,移植后能有更好的体积保留,术后并发症发生率更低。然而在大体积脂肪移植中,只使用高密度脂肪会导致低密度脂肪大量浪费,同时造成供区较大创伤。因此,如何有效的提高脂肪使用效率,同时保证远期移植效果是大体积脂肪移植需要解决的难题。因此我们尝试去探索对低密度脂肪进行优化处理的方法,期望处理后的低密度脂肪移植后能达到或者接近高密度脂肪的移植效果。团队前期的研究发现ECM/SVF-gel在移植后能获得良好的远期体积保留,并发症发生率低。但是ECM/SVF-gel获取率大约为20%,因此不适合大体积的脂肪移植。然而这种方法却值得借鉴,如果将低密度脂肪进行一定程度物理性浓缩处理,其获得的终产物是否能获得更好移植效果?因此本研究目的是探讨如何合理优化低密度脂肪,提高脂肪的移植效率,降低移植后并发症的发生以及在临床应用中进行对比研究。在本研究中,我们将低密度脂肪物理浓缩后获得的产物命名为CLDF(Condensed low density fat)。方法与实验结果实验将从以下几个方面进行:1)不同密度脂肪间的成分比较及移植效果比较;2)CLDF的制备方法及标准、定义;3)CLDF中细胞亚群分析;3)CLDF中ECM含量以及类型的分析;4)CLDF移植后保留率及并发症的体内实验研究;5)CLDF联合HDF在乳房重建的临床应用研究。按照标准的Coleman处理方法获得的脂肪按密度梯度分为上、下层各1/2。上层为低密度脂肪,下层为高密度脂肪。我们发现HDF中SVF以及ECM的含量均高于LDF以及Coleman脂肪,并且移植效果更好。所以我们尝试将获得的低密度脂肪进行机械力处理,离心及去油去水后获得浓缩脂肪成份。在机械处理过程中,随着处理时间以及次数的增加,最终获得的体积会逐渐降低。我们将获得的三组浓缩程度为原体积的70%、50%以及30%的脂肪产物进行组织细胞及ECM成分对比,选择理化性质最接近高密度脂肪的浓缩组,将其定义为浓缩低密度脂肪CLDF。从脂肪抽吸到Coleman脂肪再到CLDF,我们制定了相应的标准化流程最终获得浓缩的脂肪组织CLDF。CLDF组织连接紧密,具有一定的弹性,组织内含有较多的胶原成分。电镜显示产物内存在大量空间结构完整的ECM和大、小体积的脂肪细胞。浓缩程度不同,组织内大体积的单房脂肪细胞数量也存在差异。浓缩程度在30%的CLDF与正常脂肪组织以及高密度脂肪、低密度脂肪相比,去除了绝大多数直径较大的成熟单房脂肪细胞,保留大量的血管片段、细胞外基质。SVF细胞数量达到了低密度脂肪的2-3倍,而ECM的含量也为低密度脂肪的2-3倍。将新鲜制备的LDF、Colemanfat以及HDF、CLDF用于裸鼠体内实验,在移植后1、3月时间点观察,CLDF体积保留稳定,接近高密度脂肪的移植效果,而其中移植效果最差为LDF。将CLDF联合HDF混合移植用于乳腺癌术后乳房重建,术后6月结果显示:CLDF+HDF混合移植组体积保留率为44.06%±3.64%,优于单纯的Coleman移植组(33.00%±4.07%)。并发症的发生率在混合移植组为5%,优于单纯Coleman移植组的25%。结论1、CLDF是将离心后低密度脂肪通过纯物理方法处理后含有较高浓度ECM以及SVF细胞和小体积脂肪细胞的富集物。2、按照本课题组制定的标准流程制备出的CLDF,保留了小体积脂肪细胞、SVF细胞以及空间结构完整的细胞外基质,有利于移植体积的保留,同时破坏了大体积单房脂肪细胞,减少无效体积,降低了并发症的发生率。3、在乳房重建的临床应用中,CLDF移植后远期体积保留较单纯Coleman脂肪移植更好,并发症发生率更低。4、CLDF制备简单、使用安全,符合当前政策法规对于临床进行组织/细胞移植的要求。经初步临床观察,在大体积脂肪移植中具有广泛的临床应用前景,值得深入研究和推广应用。