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背景恶性淋巴瘤(Malignant Lymphoma, ML)是起源于人类免疫系统细胞及其前体细胞的恶性增生性疾病。根据临床病理特点可以分为霍奇金淋巴瘤(Hodgkin’s lymphoma, HL)和非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma, NHL)两种类型。在恶性肿瘤中,我国ML发病率呈逐年上升趋势,是目前发病率增长最快的肿瘤之一,常发生于青壮年,已成为严重威胁着人类健康和生命的一种疾病。现阶段ML治疗的主要手段是以化疗为主的综合治疗,其在提高治疗效果和延长患者生存期方面具有非常重要的作用。NK/T细胞淋巴瘤(NK/T cell lymphoma)属于非霍奇金淋巴瘤的一种,WHO于2001年将其作为淋巴造血组织肿瘤中的一种独立类型,占全部ML的2%-10%。NK/T细胞淋巴瘤是一种从发病机制到诊断、分型都很复杂的造血系统恶性肿瘤。该病起病隐匿、早期诊断困难,具有高度侵袭性,病程进展快,生存期短,预后较差等特点,化疗是NK/T细胞淋巴瘤必不可少的治疗手段,但肿瘤细胞对化疗药物的固有的或获得性的耐药则是NK/T细胞淋巴瘤难以取得确切疗效的主要障碍。目前国际上对于NK/T细胞淋巴瘤尚无标准的治疗方案,因此寻找高效低毒的化疗药物成为治疗本病的关键。近年来,体外药物敏感性实验已被广泛用于各种实体肿瘤体外药敏谱的研究,但是在淋巴瘤方面,特别是在NK/T细胞淋巴瘤,此类研究尚不多见。肿瘤细胞的体外药敏检测方法主要有肿瘤克隆形成实验、短期原代培养细胞毒实验(MTT、CCK-8等)、放射性标记核酸前体掺入法、ATP荧光药敏检测法等。在这些试验方法中,MTT法以其简便、快速、准确、成本低并可同时进行多种化疗药物的药敏检测等优点,已广泛应用于各种恶性肿瘤的研究中。我们所采用的CCK-8法是MTT法的改良,它与MTT法相比,省去了洗涤细胞,不需要有机溶剂溶解的步骤,具有检测快速,灵敏度高,准确性佳,重复性好的特点。通过体外药物敏感性试验可以挑选出敏感的化疗药物,从而指导临床,用于临床研究,建立标准的治疗方案。目前在临床治疗中,多药耐药现象(MDR)的出现是当今肿瘤治疗的一大技术难题,mdr-1基因的高表达是产生MDR的主要原因。寻找不依赖mdr-1基因表达且对NK/T细胞淋巴瘤敏感的化疗药成为能成功治疗该疾病的关键。在此类研究中,RT-PCR技术较为常用。RT-PCR将以RNA为模板的cDNA合成同PCR结合在一起,提供了一种分析基因表达的快速灵敏的方法。RT-PCR常用于对表达信息进行检测或定量。另外,这项技术还可以用来检测基因表达差异,比其他RNA分析技术更灵敏,更易于操作。目的观察顺铂、卡铂、奥沙利铂、洛铂四种铂类药物对人NK/T细胞淋巴瘤细胞系SNK-6细胞增殖的影响及SNK-6细胞多药耐药基因mdr-1的表达情况。方法应用体外细胞培养技术对SNK-6细胞进行体外培养,采用CCK-8法检测四种铂类药物对SNK-6细胞的增殖抑制率,倒置显微镜观察细胞学形态,应用统计学方法计算四种铂类药物各自的半数抑制浓度即IC50值,采用RT-PCR方法检测SNK-6细胞mdr-1的表达。结果1不同浓度的四种铂类药物对SNK-6细胞增殖均有不同程度的抑制作用,并呈剂量依赖性,顺铂、卡铂、奥沙利铂、洛铂其各自的半数抑制浓度IC50值依次为:5.737±0.465ug/ml、39.673±3.825ug/ml、11.151±1.397ug/ml、1.527±0.326ug/ml。2通过RT-PCR方法检测SNK-6细胞mdr-1的表达,结果表明SNK-6细胞mdr-1的表达呈阳性。结论1四种铂类药物对SNK-6细胞均有不同程度抑制作用,但SNK-6细胞mdr-1呈阳性表达,我们推测铂类药物可能为不依赖mdr-1表达的且可用于NK/T细胞淋巴瘤治疗的药物。2在对悬浮细胞进行药物敏感性试验时,可采用CCK-8法进行。