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神经流行病学研究结果表明,绝经期后女性卒中发病率比绝经期前的女性发病率明显增高,在外源性雌激素替代疗法治疗女性更年期综合症的研究中发现,雌激素与缺血性卒中的发生和预后有关,并使用其预防和治疗卒中。虽然在激素替代治疗的研究中发现存在着可导致肿瘤的风险,但是它对卒中的治疗作用仍然越来越受到人们的关注。
目前雌激素在脑缺血动物和细胞损伤的模型上被广泛研究,认为它在缺血性脑卒中的预防及治疗方面有着良好的结果,并且在许多的研究中观察到,雌激素可以挽救在缺血环境中的细胞。然而在现有的实验中,临床试验还很少,不能得出肯定的结果,而且从随机临床资料的数据中看到,雌激素应用于冠心病和卒中的预防及治疗尚有疑问。本相研究将评估雌激素对局灶性脑缺血后治疗的有效性,以及它的治疗机制。
一氧化氮(nitricoxide,NO)是一种不稳定的高度弥散性自由基性质的信息分子,在生物体内广泛分布,其生理功能多样,有许多尚未研究透彻。近年的研究发现,NO通过抑制DNA合成和神经干细胞(neuralstemcells,NSCs))的增殖,促使NSCs向分化方向发展.在神经系统发育过程中起着重要的调控作用。内源性NO在体内由一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase,NOS)催化合成。内源性NO对大鼠NSCs增殖的抑制作用与雌激素的脑保护作用又有什么关系哪.
这些研究表明,外源性雌激素对两性大鼠的缺血性脑损伤都有明显影响。
第一部分成熟大鼠脑内源性神经前体细胞的分布及缺血损伤后的表达与增殖目的:探讨大鼠局灶脑缺血后不同时点各脑区神经前体细胞的激活和神经发生情况,进而阐明脑缺血后自身修复的启动过程,为临床治疗脑缺血提供理论帮助。
方法:雄性Wistar大鼠采用线栓法制作局灶脑缺血模型,以大鼠神经功能障碍的出现作为脑缺血的整体评价,TTC染色观察脑梗死范围,HE染色观察脑组织生理病理学变化,用Nestin、Brdu免疫组化染色方法观察神经前体细胞分布、增殖情况,RT-PCR法检测Nestin,NSE,GFAPmRNA的表达情况验证有无神经的发生。
结果:大鼠大脑中动脉闭塞模型经检验缺血区位于同侧大脑皮层及纹状体区。
结论:大鼠MCAO模型稳定,重复性好,是研究局灶性脑缺血后自身修复和内源性神经前体细胞激活的理想模型。正常成年大鼠脑内SVZ和DG存在具有增殖活性的神经前体细胞。脑缺血后不同时间双侧神经发生区神经前体细胞增殖均增加,以损伤侧明显。
第二部分雌激素对雄性大鼠缺血性卒中的神经保护作用目的:探讨在大鼠局灶脑缺血后缺血等损伤因素动员成体内源性神经前体细胞增殖及雌激素对神经前体细胞的保护作用,及其雌激素促分化作用与NO的关系,进而研究雌激素对神经前体细胞可能存在的保护机制。
方法:采用雄性去势Wistar大鼠制作局灶脑缺血模型的基础上建立缺血不同时间(3、7、14、21天)的雌激素生理剂量治疗组、缺血对照组和假手术组。测定血中17β-E2的含量、脑匀浆中NOS活性、检测不同时点各部位的nestin阳性细胞数目及BrdU阳性细胞数、脑梗死体积比的测定、脑组织水肿情况测定、神经症状学评分。探讨雌激素、一氧化氮对脑缺血后神经前体细胞的影响。
结果:假手术组和缺血对照组手术前雌激素水平及NO水平均明显低于治疗组,假手术组和缺血对照组无显著性差异,设定为基础水平。雌激素治疗组脑梗死体积、脑水肿及病理损害和神经功能损伤程度明显减轻。
结论:雌激素可使缺血损伤区内源性神经前体细胞增多,并参与脑缺血损伤的修复。雌激素和NO可能抑制神经前体细胞增殖并参与了神经前体细胞的增殖分化的调控。雌激素对神经前体细胞保护机制之一可能是:雌激素可间接使诱导性一氧化氮合酶(iNOS)产生的NO减少,从而减轻了组织的自由基损伤及炎性反应;同时雌激素使内皮源性(eNOS)产生的NO升高,可改善局部脑血流从而使神经前体细胞存在的条件得以改善,细胞数量增多。
第三部分雌激素受体后效应-NO介导对神经干细胞作用的分子机制目的.
方法:采用体外分离胎鼠脑皮层神经干细胞,纯化并培养一定时间后,进行雌激素干预,用免疫组化染色和生化法观察nestin阳性细胞、BrdU阳性细胞的变化及雌激素对NO释放的影响、用免疫细胞化学的方法检测雌激素受体α的存在,以分子生物学方法检测雌激素与神经干细胞共同培养后eNOSmRNA的表达。
结果:雌激素可使体外培养的胚胎神经干细胞产生的NO水平升高;而产生的NO使增殖的神经干细胞数量减少但表达神经元及星形胶质细胞标记性抗原阳性的细胞数量增多。
结论:雌激素可降低胚胎神经干细胞的增殖能力,并使神经干细胞表达eNOS活性。NOS的激活是雌激素通过其受体介导产生NO。NO可使神经干细胞向靶细胞分化。其分子机理是:雌激素受体后效应-NO对神经干细胞的调控作用。