【摘 要】
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目的:本实验主要通过观察通督安神方对抑郁模型大鼠的行为学指标,检测环磷酸腺苷（CyclicAdenosine monophosphate,cAMP）、蛋白激酶A（Protein kinase A,PKA）、环磷酸腺苷反应原件结合蛋白（cAMP response element binding protein,CREB）的蛋白表达水平,来探讨通督安神方的抗抑郁作用机制。方法:本实验将40只SPF级S
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目的:本实验主要通过观察通督安神方对抑郁模型大鼠的行为学指标,检测环磷酸腺苷（CyclicAdenosine monophosphate,cAMP）、蛋白激酶A（Protein kinase A,PKA）、环磷酸腺苷反应原件结合蛋白（cAMP response element binding protein,CREB）的蛋白表达水平,来探讨通督安神方的抗抑郁作用机制。方法:本实验将40只SPF级SD雄性大鼠随机分成5组,分别是:空白对照组、模型对照组、氟西汀组、逍遥散组以及通督安神方组,每组8只。采用慢性温和不可预见刺激结合孤养法制备抑郁症模型大鼠,连续造模21天,在造模以及治疗的前后对大鼠的体重指数、糖水偏好实验及旷场实验等行为学指标进行观测,以检测造模成功与否。造模成功后进行药物的干预,进行7天灌胃给药治疗,正常对照组和抑郁模型对照组灌等容量生理盐水,氟西汀组、逍遥散组以及通督安神方组灌服相应的药物。治疗结束之后,采用蛋白质印迹法（Western blot,WB）检测大鼠海马cAMP、PKA、CREB蛋白表达水平,免疫组织化学法检测海马区CREB的含量。对实验数据进行统计学分析,用均数±标准差（X±S）表示,多样本均数比较采用单因素方差分析,P＜0.05则差异具有统计学意义。结果:1.行为学检测结果:从体重变化结果可知,在造模后,模型对照组、逍遥散组、通督安神方组及氟西汀组大鼠的体重增长速度皆较空白对照组慢,且与空白对照组相比,差异均具有统计学意义（P＜0.01）。灌胃治疗后,与模型对照组比较,氟西汀组大鼠体质量增加较明显（P＜0.01）,逍遥散组、通督安神方组差异无统计学意义。从糖水偏好实验结果可知,造模前各组大鼠糖水偏好率无显著性差异;造模后,与空白对照组比较,模型对照组、逍遥散组、通督安神方和氟西汀组大鼠糖水偏好率显著下降（P＜0.01）;给药后,与模型对照组大鼠比较,通督安神方组大鼠的糖水偏好率显著升高（P＜0.05）。从旷场实验结果可知,造模后,与空白对照组比较,大鼠旷场总距离显著降低、大鼠旷场静止时间明显增加（P＜0.01或P＜0.05）。给药治疗后,与模型对照组比较,各治疗组大鼠的旷场总距离显著增加（P＜0.01）,差异具有统计学意义。2.实验检测指标结果:（1）WB法检测结果:给药治疗后,与空白对照组比较,模型对照组cAMP、PKA、CREB蛋白表达水平显著降低（P＜0.01）,与模型对照组相比较,逍遥散组、通督安神方组和氟西汀组cAMP蛋白表达水平明显升高（P＜0.05或P＜0.01）;通督安神方组和氟西汀组的PKA、CREB蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）;与逍遥散组相比较,通督安神方组的cAMP、CREB蛋白表达水平升高明显（P＜0.01）;与氟西汀组比较,通督安神方组的cAMP蛋白表达水平升高比较明显（P＜0.01）。（2）免疫组化实验结果:模型对照组与空白对照组比较,模型对照组海马的CA1、CA3区CREB的阳性表达显著下降（P＜0.01）;与模型对照组比较,氟西汀组在海马CA1区CREB的阳性表达显著上升（P＜0.01）,通督安神方组在海马CA1、CA3区CREB的阳性表达显著上升（P＜0.05）,逍遥散组则差异无统计学意义。结论:通督安神方可以改善抑郁症模型大鼠的行为学表现,具有改善抑郁症症状的作用。可以提高抑郁模型大鼠海马区cAMP、PKA、CREB蛋白的含量,通过增强cAMP-PKA-CREB信号通路作用,改善大鼠的抑郁状态,提示cAMP信号通路是通督安神方作用的靶点之一。
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