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皮肤具有保护、代谢和感觉等重要的功能。皮肤创伤修复过程涉及诸多生理生化反应,其中各类氧化还原反应起着重要作用。特别是慢性创伤中,经常会因氧化损伤造成创伤长期不愈。因此,研究制备具有抗氧化损伤的新型创伤修复材料具有重要意义。
本研究制备了γ-聚谷氨酸(γ-PGA)水凝胶,并通过化学及物理方式负载超氧化物歧化酶(SOD),研究其在创伤修复中的应用。本文研究了利用牛磺酸同γ-PGA生成磺化聚谷氨酸(γ-PGA-S),以乙二醇二缩水甘油醚为交联剂,生成磺化γ-PGA水凝胶,通过物理包埋的方式负载SOD,应用于糖尿病大鼠创伤模型中。由NMR谱图可知,制备的磺化γ-PGA磺化比例约为44.6%。磺化凝胶体系溶胀率随着磺化γ-PGA比例上升而提高,并随着溶液体系的pH下降而溶胀性随之下降。酶活力检测表明释放后的SOD仍具有较高活性,证明负载方式未造成SOD失活。通过体外细胞毒性实验及细胞抗氧化实验,证明凝胶体系具有较好的细胞相容性,并随着磺化比例提升,抗氧化性能随之提升。糖尿病大鼠创伤模型实验,直接证明负载SOD的磺化,γ-PGA凝胶体系具有很好的抗氧化损伤性能,能促进创面快速愈合。表明此类γ-PGA水凝胶可用于慢性创伤修复,可以作为抗氧化水凝胶创伤敷料。
本论文还利用化学修饰方法,将γ-PGA侧链羧基活化,同SOD的赖氨酸残基氨基进行反应,生成γ-PGA修饰的超氧化物歧化酶(SOD-γ-PGA)。并利用胱胺作为交联剂,制备化学键合SOD的γ-PGA水凝胶。通过检测SOD-γ-PGA酶活力及酶比活力保持率,表明所选用反应方法条件温和,反应专一,未造成SOD变性失活。酸性溶液环境中,反应后的SOD-γ-PGA较纯SOD具有更好的活性保持能力。体外细胞毒性实验表明,凝胶体系无细胞毒性。凝胶体系在体外细胞抗氧化实验中具有较好的抗氧化损伤效果。
总之,本研究通过物理及化学方式制备了负载SOD的γ-PGA水凝胶体系,通过对凝胶溶胀性能,体外释放,酶活性检测,细胞抗氧化及动物创伤模型等检测,证明负载SOD的γ-PGA水凝胶体系可用于慢性创伤修复,作为抗氧化型水凝胶创伤修复材料。