【摘 要】
:
目的:研究大肠杆菌可溶性表达的重组人角质细胞生长因子-I型N端缺失23个氨基酸后的突变体(△N23KGF-I,简称△K23)的聚乙二醇修饰、纯化工艺及其体内外生物活性。 方法:(1)
论文部分内容阅读
目的:研究大肠杆菌可溶性表达的重组人角质细胞生长因子-I型N端缺失23个氨基酸后的突变体(△N23KGF-I,简称△K23)的聚乙二醇修饰、纯化工艺及其体内外生物活性。 方法:(1)破菌,SP sepharose F.F纯化,复性和Heparin sepharose F.F纯化得到突变体纯品;(2)用mPEG-马来酰亚胺修饰截短重组人角质细胞生长因子-I(△K23)的游离巯基,然后胰蛋白酶酶切,采用液质联用技术,获得质量肽图。对比单体及修饰后的蛋白还原质量肽图和非还原质量肽图,确定PEG的修饰位点;(3)通过NBL-7细胞、大鼠五氟尿嘧啶肠粘膜损伤模型进行体内外生物活性评价。 结果:获得的△K23单体的纯度能达到95%,工艺稳定;通过对修饰工艺的研究,得到了两个不同的修饰产物:mPEG-Mal-△K23-40(缩写:PEG-K23-40)、mPEG-Mal-△K23-102(缩写:PEG-K23-102)。前者修饰在Cys40位,后者修饰在Cys102位,100mg级△K23样品修饰后纯度达到95%以上,而且修饰位点单一。经体外的NBL-7的细胞测活,△K23和PEG-K23-40、PEG-K23-102的活性保留了以KGF-1国际标准品作为对照品的生物活性的98%,65%,30%。在大鼠的肠粘膜损伤修复实验中,△K23和PEG-K23-40相对于模型组有明显的效果,PEG-K23-102的效果则不明显。 结论:在非常规的PEG修饰条件下,首次成功的修饰了△N23KGF-I的两个半胱氨酸残基,并得到了高纯度,修饰位点单一的两种修饰产物:PEG-K23-40、PEG-K23-102。经体外活性的结果分析,PEG-K23-40初步证明有效,活性保留了65%。在体内活性方面,相对于模型组,PEG-K23-40也确实对粘膜损伤有修复作用,可以作为针对粘膜损伤的长效候选药物。在相同条件下,PEG-K23-102作用不明显,其其他的生物活性则有待研究。
其他文献
目的:分析低分子肝素配合泼尼松治疗小儿肾病综合征的临床疗效.方法:将我院于2018年2月至2019年2月收治的小儿肾病综合征患儿100例作为观察对象,随机分为观察组 (n=50)及对照
细胞的氧化还原状态在生物体各种各样的生理病理过程中扮演着重要的角色,但目前检测氧化还原代谢物的方法仍存在着一些弊端。本文针对两种重要的氧化还原代谢物—NADH/NAD+和N
目的:我们建立了雌激素受体调节剂高通量筛选模型,并开展了批量筛选,目的是为以后用Microbta 1450进行大规模高通量筛选建立合适的模型.从而为寻找开发新型的雌激素受体调节
目的:探讨老年糖尿病合并院内感染的风险因素与预防对策.方法:回顾性分析2017年10月~2018年10月我院104例老年糖尿病患者的临床资料,根据是否出现院内感染将其分为感染组22例(
In this paper, we apply the recursive genetic programming (RGP) approach to the cognition of a system, and then proceed to the detecting procedure for structura
目的:分析咽炎茶治疗慢性咽炎的临床疗效及安全性.方法:以本院2018年4月~2019年4月收治的72例慢性咽炎患者作为研究对象,借助双盲随机抽样法分为对照、研究组,每组列入36例,对
苦碟子皂苷(ISHS)是从菊科植物抱茎苦荬菜提取黄酮类成份后的废液中分离出的总皂苷.该文观察了苦碟子皂苷对实验性高脂血症大鼠血清总胆固醇、脂蛋白-胆固醇代谢的影响及其抗
Artificial neural networks (ANNs) have been widely used as a promising alternative approach for forecast task because of their several distinguishing features.
目的:研究耳穴疗法联合针灸对老年轻度高血压的治疗效果.方法:选取2018年8月-2019年8月我院收治的轻度高血压患者84例作为研究对象,采用抛硬币法将其分为观察组(40例)和对照
目的:研究复方灯盏花滴丸对氧化应激致大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞(PC12细胞)损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。 方法:培养PC12细胞,实验分为6组:空白对照组,氧化损伤组(模型组),复