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近年来随着人们饮食习惯的改变和物质生活水平的提高,高脂血症成为继胆源性、酒精性,急性胰腺炎(AP)的常见病因。高脂血症能诱导和加重急性胰腺炎,但是其导致急性胰腺炎病变程度加深的机制尚不清楚。通过对AP的发病机制研究表明,胰腺腺泡细胞内发生钙超载是一个重要的触发及加重因素。存在于细胞膜表面及细胞内存储钙离子的细胞器上的钙离子通道会因为高脂饮食而发生结构的改变从而影响细胞内信号传导过程,引起细胞发生钙超载。但遗憾的是,钙超载在高脂血症性胰腺炎中的研究,国外报道尚少,国内在这一领域尚属空白。该课题首次对钙超载在大鼠高脂血症性胰腺炎中的机制进行深入的探讨。目的:探讨钙超载在高脂血症性胰腺炎发病机制中的作用及意义,从而为预防和治疗高脂血症性胰腺炎提供行之有效的策略。方法:80只雄性SD大鼠随机分为四组,每组20只。假手术组(SO组):普通饲料喂养,开腹后仅轻轻翻动12指肠及胰腺组织后关腹,不做处理。高脂血症组(HL组):予以雄性SD大鼠高脂饲料(20%猪油,10%胆固醇,0.1%甲基硫氧嘧啶,1%胆酸钠,68%普通饲料)喂养4周建立高脂血症模型,开腹后仅轻轻翻动12指肠及胰腺组织后关腹,不做处理。重症急性胰腺炎组(SAP组):普通饲料喂养4周的大鼠,建立重症急性胰腺炎大鼠模型。四组大鼠均在进行手术前12小时禁食和禁水,选用1%戊巴比妥钠为麻醉药物通过腹腔内注射(3-4ml/kg)充分麻醉大鼠,手术区消毒铺手术巾,于上腹部采取正中切口2cm进腹。牵拉十二指肠暴露出胰胆管走行,在十二指肠降部外侧壁寻找到胆胰管开口处既十二指肠乳头处。用尖端磨平的1ml空针穿刺逆行刺入胰胆管末端1cm,用无损伤性小动脉夹在近肝门处夹闭胰胆管近肝门端,以注射速度0.1ml/min往胆胰管内注入5%Tc-Na,肉眼可见5%Tc-Na液体缓慢通过胆胰管均匀分布胰腺组织,当发现药物流经的胰腺组织逐渐出现充血水肿后缓慢轻柔地拔出注射针避免针尖损伤胰腺组织,松开放置于肝门端的动脉夹,仔细检查腹腔确认无活动性出血及明确无其他操作所致损伤后逐层关腹,术后于大鼠腹部皮下注射生理盐水(3ml/100g)补充手术丢失水分。高脂血症性胰腺炎组(HLP组):雄性SD大鼠高脂饲料喂养4周后,以同样方法建立重症急性胰腺炎模型不做其他处理。造模后观察大鼠的一般情况。在建立急性胰腺炎模型的时候,均取一次穿刺成功大鼠为模型,避免反复穿刺所致其他损伤。24小时后统计死亡率,随即处死大鼠,肉眼观察胰腺组织出血、水肿等变化取出胰腺组织。采用ELISA检测胰腺组织三磷酸肌醇(IP3),采用钙离子比色法测定胰腺腺组织内钙Ca离子浓度。采用western blot技术检测胰腺组织NF-κbP65蛋白表达。采用ELISA法检测血清TNF-a.IL-6。HE染色对大鼠胰腺组织学损伤进行评估。测定SAP组,HLP组大鼠,腹水量。处死大鼠后,立即穿刺心脏收集血液,检测血TG,血淀粉酶。结果:1.经过高脂饲料喂养4周的大鼠血脂(TG)与正常饲料喂养的大鼠相比有明显增高差异有统计学意义(P<0.05)。体重增长值较正常饲料喂养组较低,差异有统计学意义(P<0.05)。2.术后24小时SO组与HL组大鼠无一死亡,SAP组死亡4只,HLP组死亡6只,死亡率高于SAP组。术后SAP与HLP组大鼠胰腺HE染色均证实为急性重症胰腺炎。SAP组死亡5只,HLP组死亡7只,死亡率高于SAP组。腹水:SO组及HL组处死后无血性腹水; SAP组、HLP组均有血性腹水,HLP组血性腹水量明显多于HLP组差异有统计学意义(P<0.05)。血清淀粉酶:在假手术组中SO组及HL组与重症急性胰腺炎组相比未见明显增高;SAP组相对于HLP组淀粉酶升高明显差异有计学意义(P<0.05)。血TG:建立重症急性胰腺炎模型后,SAP组血TG较术前明显增高,HL组,HAP组,SO组前后无明显差别。胰腺损伤大体评分,HLP组相比SAP组,坏死,出血及水肿明显重于SAP组(P<0.05)。胰腺病理切片组织学评分,HL组相对于SO组炎症较重,HLP组胰腺损伤病理学评分明显高于SAP组(P<0.05)。3.血清细胞因子:血清TNF-α、IL-6浓度在假手术组中SO组与HL组比较无明显差异,SO组与SAP组,HL组与HLP组相比差异明显有统计学意义(P<0.05),HLP组血清细胞因子浓度比较SAP组差异明显有统计学意义(P<0.05)。4.假手术组SO组与HL组相比腺组织内钙离子浓度与三磷酸肌醇(IP3),差异有统计学意义(P<0.05),SO组与SAP组,HL组与HLP组胰腺组织内钙离子浓度与三磷酸肌醇(IP3)相比差异明显(P<0.05),HLP组与SAP组相比差异有统计学意义(P<0.05)。5.Western印迹显示各组胰腺组织内NF-κbP65蛋白表达情况。SO组与HL组,SO组与SAP组,HL组与HLP组,SAP组与HLP组相比差异明显有统计学意义(P<0.05)。结论:1.经过4周的大鼠高脂饲料喂养可成功建立高脂血症性大鼠模型,胆胰管逆行注射5%Tc-Na可以建立急性重症胰腺炎大鼠模型。2.高脂血症在胰腺炎的发病中起着诱导及加重的因素,同时重症急性胰腺炎的发展也会引发一过性的高脂血症。3.在高脂血症性胰腺炎发病过程中胰腺腺泡细胞内钙离子浓度,IP3均高于重症急性胰腺炎,而反应其病变程度的指标NF-κbP65,TNF-α、IL-6等也随之增高。表明高脂血症背景下,钙离子通道开放增加,大量的钙离子进入胰腺腺泡细胞内发生钙超载现象从而加重胰腺炎的病程进展。说明钙超载在急性胰腺炎的发病过程中发挥着及其重要的作用。