我们实验室前期研究发现，合成组胺(HA) 的组氨酸脱羧酶(HDC) 与合成去甲肾上腺素(NE) 的酪氨酸羟化酶和多巴胺-β-羟化酶(DβH) 共存于交感神经元内，同时HA和NE本身也共存其中；高浓度K+除极可以触发心脏突触体释放HA。这些结果提示，HA很可能是一种尚未被认识的交感神经递质。然而，要确认HA为一种新的交感神经递质，还必须明确HA是否能够从交感神经末梢释放？其释放是否符合经典递质释放的规律？交感神经突触前受体对HA释放是否具有调控作用，以及这些受体是否参与共同调解HA的释放？为了回答上述未知问题，本研究采用电场刺激离体灌流豚鼠输精管标本，应用荧光分光光度计检测灌流液中HA和NE等方法，了解组胺的释放规律和调控规律，为揭示和证明交感神经源性组胺的递质特性提供更为有力的证据。 1 改良的组胺荧光分光光度检测方法的建立 为了检测组织液中组胺的释放含量，针对现有方法存在操作烦琐，耗时，或者灵敏度不高等不足，我们对已有的荧光分光光度法进行了改良，建立了简单、快捷、灵敏、稳定的检测HA 的方法。采用邻苯二甲醛(OPA) 对组织中释放的组胺进行衍生，对衍生物进行激发与发射波长扫描；采用Na3PO4 沉淀组织液中的干扰离子，建立了检测组胺的荧光分光光度法。结果表明组胺-邻苯二甲醛衍生物的最大激发波长和发射波长分别为347 nm和442 nm，Na3PO4 能够有效的消除Ca2+ 和Mg2+离子对荧光的淬灭作用。本法测定组胺的工作曲线回归方程为F = 14.276C +40.392，相关系数γ =0.9995，线性范围为1～100 ng/ml，检出限为0.5 ng/ml。 高、中、低浓度组胺的回收率为91.9％～115.8％。该方法可用于检测组织中释放的组胺，无须提取，操作简便、快捷，效果可靠。 2 不同条件电场刺激对交感神经源性组胺释放的影响 分别向离体豚鼠输精管标本施以12.5Hz、25Hz 或50Hz 电场刺激，利用荧光分光光度法检测营养液中组胺和去甲肾上腺素的释放量的变化。结果显示：随着刺激频率增强，组胺释放量也随之增加，但是组胺释放量的增加幅度较去甲肾上腺素大。与对照组相比，河豚毒素预处理后组胺释放量显著下降，营养液中组胺的浓度从1.16±0.11 降至0.14±0.08 pmol/ml·mg；应用6-羟基多巴胺也可取消电场刺激引发的组胺释放，组胺浓度从1.09±0.18 降至0.11±0.05 pmol/ml·mg；而以囊泡单胺转运体2 的抑制剂利血平预处理后，电场刺激引发的组胺释放也减少，由对照组的1.11±0.13 降至处理组的0.27±0.12 pmol/ml·mg。提示本实验所检测到的组胺是交感神经源性，且相对去甲肾上腺素而言，组胺的释放对于高频刺激更为敏感，其释放动力学过程与去甲肾上腺素可能存在差异。 3 突触前α2受体以及HA H3受体对HA释放的共同调控作用 应用肾上腺素α2受体选择性激动剂brimonidine 可浓度依赖性地抑制电场刺激离体豚鼠输精管所引发的组胺和去甲肾上腺素的释放。而α2受体选择性拮抗剂育亨宾可取消brimonidine 对组胺释放的抑制作用。与对照组相比，单独应用育亨宾可使组胺释放增加。结果提示，交感神经末梢突触前α2受体对组胺释放有抑制性调控作用。组胺H3 受体选择性激动剂R-(α)-methyhishistamine (αMeHA) 对组胺释放也有抑制作用，该效应可被H3受体拮抗剂thioperamide 所取消，表明H3受体对组胺释放也具有负反馈调控作用。 当运用thioperamide 阻断突触前H3受体时，brimonidine 对交感神经末梢组胺释放的抑制作用增强，抑制程度由35±3％ 增加至61±7％ (n=5)。而当突触前H3受体为αMeHA 所激动时，brimonidine 对交感神经末梢组胺释放的抑制作用消失。 结果提示，α2 受体对组胺释放的抑制性调控作用与交感神经突触前H3 受体的激活状态有关。 结论：(1) HA能够从交感神经末梢释放，其释放动力学过程与去甲肾上腺素可能存在差异；(2) 交感神经源性组胺的释放受交感神经突触前α2受体和H3受体的双重负性调控；(3) 交感神经突触前HA H3 受体可能是调控交感性组胺释放的优势受体。