【背景】胃癌的死亡率居全球癌症死亡率的第二位。在我国胃癌的死亡率位于各种癌症之首。早期胃癌预后较好而进展期胃癌预后较差,因此决定胃癌患者预后的关键在于早期诊断和早期治疗。目前胃癌及癌前病变的诊断主要依赖于胃镜下活检行组织病理学检查。而早期胃癌及癌前病变普通胃镜下肉眼观察与炎症及正常黏膜常无明显差异,普通胃镜下盲目活检常易因靶点偏移而造成漏诊。近年来随着放大内镜、窄带成像术等新的检查技术投入临床使用,胃癌及癌前病变的检出率得到了有效的提高,但放大内镜、窄带成像术技术设备要求高,在我国尚难以普及,故色素内镜显得更为实用。色素内镜是指在常规内镜检查的基础上,辅助使用色素制剂,增加病变与正常组织的对比度,使病灶的形态、范围更为清晰,从而提高肉眼识别能力,引导活检,提高病变检出率。美蓝、刚果红、靛胭脂等常单独或联合应用于早期胃癌及癌前病变的检测。靛胭脂为对比染色剂,沉积于黏膜皱襞,不被吸收,也不和黏膜结合,与正常黏膜色泽形成鲜明对比,并可显示出黏膜的细微凹凸改变及其立体结构,从而使得病灶更好的显示出来,并为内镜下钳取病变组织提供靶向目标,提高病变的检出率。内镜下检查时喷洒醋酸,最先是由Guelrud等把该项技术用于消化道黏膜病变的检测。后来Yagi等和Tanaka等联合放大内镜应用于胃癌及癌前病变的检测。醋酸可以使胃黏膜上皮细胞蛋白质的三级结构发生可逆性改变,黏膜表面出现一过性白化,从而增加了病变组织和正常组织的对比度。Yamashita等及Sakai等对早期胃癌患者应用醋酸联合靛胭脂染色后发现:刚开始肿瘤区域和非肿瘤区域均被染成蓝色,几分钟后,肿瘤区域逐渐褪色,而非肿瘤区域保持蓝色,且肿瘤区域和非肿瘤区域边界非常清楚。本研究我们对130例胃黏膜异常者运用醋酸联合靛胭脂染色,以探讨这一新的染色方法在临床内镜检查中的应用价值。【目的】探讨内镜下醋酸联合靛胭脂染色这一新的染色方法对早期胃癌及癌前病变的临床诊断价值。【方法】一、病例的选择:2009.9-2010.7因各种消化道症状在我科接受常规胃镜检查,发现以下至少1种病变者: (1)黏膜粗糙;(2)黏膜色泽发生改变;(3)黏膜下血管网模糊、紊乱或消失;(4)黏膜局部隆起;(5)浅表糜烂或溃疡;(6)局部胃壁蠕动差。常规胃镜检查即可基本明确诊断的胃息肉、胃癌患者,胃出血影响染色者不纳入。随机分为染色组和对照组。二、检查方法:胃镜检查前常规服用利多卡因胶浆。发现可疑病灶后,尽量冲净胃黏膜表面的黏液及附着物,经活检孔插入喷洒导管,将配制好的1.5%醋酸20ml均匀喷洒于病灶黏膜,可见黏膜出现白化,20秒钟后再次喷洒0.2%靛胭脂20ml,观察至少5分钟,根据胃黏膜着色变化情况分为黏膜褪色、着色不良及着色均匀,黏膜褪色指醋酸加靛胭脂喷洒后刚开始均被染成蓝色,经过2-3min的变化,整个病灶表面染色剂大部分褪去,只留下非常浅淡的染料附着,整个病灶表面呈现胃黏膜的颜色为主,而周围正常区域保持蓝色;着色不良指醋酸加靛胭脂喷洒后刚开始均被染成蓝色,经过一段相同时间的观察,表面仍留有比较明显的色素附着,而颜色比前述褪色病灶要深,染色区表现为斑点状或斑片状着色不均。在染色异常区及边缘染色正常区活检,行组织病理学检查。对照组不做染色,常规肉眼观察、判断,活检。【结果】一、染色组130例中21例出现喷洒染色剂后黏膜褪色,其早期胃癌、高级别上皮内瘤变检出率之和为95.2%(20/21);79例出现喷洒染色剂后黏膜着色不良,其肠上皮化生、低级别上皮内瘤变的检出率之和为91.1%(72/79)。二、染色组早期胃癌检出率10.0%(13/130)、上皮内瘤变检出率19.2%(25/130)、肠上皮化生检出率46.2%(60/130);对照组早期胃癌检出率2.3%(3/130)、上皮内瘤变检出率5.4%(7/130)、肠上皮化生检出率26.2%(34/130),染色组早期胃癌、上皮内瘤变、肠上皮化生检出率均明显高于对照组,差异有统计学意义(分别为P=0.01、P=0.001、P=0.001)。【结论】内镜下醋酸联合靛胭脂染色可明显提高早期胃癌及癌前病变的检出率,黏膜褪色对于早期胃癌和高级别上皮内瘤变,黏膜着色不良对于肠上皮化生和低级别上皮内瘤变的诊断有一定的指示意义。【背景】Nesfatin-1是一种新发现的厌食肽,它来源于核组蛋白2( nucleobindin 2,NUCB2)。侧脑室注入NUCB2后可以抑制大鼠摄食,而侧脑室注射NUCB2反义寡核苷酸阻断内源性NUCB2后,大鼠的摄食量增加。这些研究表明,NUCB2参与了大鼠摄食行为的生理调节。NUCB2在前激素酶的作用可以下裂解成三个片段:nesfatin-1、nesfatin-2和nesfatin-3,经侧脑室分别注射这三个片段发现,仅nesfatin-1能够抑制自由饮食大鼠的摄食量和体重增长,经侧脑室注射nesfatin-1特异性的中和抗体后大鼠摄食量明显增加,提示NUCB2裂解后的三种片段中仅nesfatin-1具有抑制摄食的功能。在中枢,Nesfatin-1免疫阳性细胞存在于下丘脑的弓状核(ARC),视上核(SON),室旁核(PVN),下丘脑外侧区(LHA)以及脑干的迷走神经背核(DMV)孤束核(NTS),动眼神经副交感核(EW)和尾脊核中,这些核团通常被认为与摄食和代谢调节密切相关。Nesfatin-1侧脑室注射抑制了自由饮食大鼠的夜间摄食量,而肾上腺皮质激素释放因子(CRF1/ CRF2)抑制剂、CRF2抑制剂则使nesfatin-1对大鼠的抑制摄食作用消失,提示侧脑室注射nesfatin-1是通过CRF2依赖途径而影响了自由饮食大鼠的夜间摄食量。Nesfatin-1免疫阳性细胞在外周主要分布在胃黏膜内分泌型细胞,胰岛及十二指肠布氏腺,在胃黏膜中nesfatin-1免疫阳性细胞主要集中在下1/3至1/2的黏膜腺中,胃黏膜的这一部位含有大量的内分泌细胞,诸如分泌胃泌素的G细胞、分泌生长抑素的D细胞、分泌ghrelin的X/A样细胞还有一些小的内分泌细胞如P细胞和D1细胞。Nesfatin-1在胃黏膜中大量与ghrelin共表达,也有少部分与生长抑素及组胺共表达。这些结果提示nesfatin-1可能与胃黏膜的分泌功能,特别是胃酸分泌相关,有关该方面的研究尚未见有报道。【目的】探讨nesfatin-1对大鼠胃黏膜泌酸功能的影响。【方法】一、雄性SD大鼠,体重200-250g,在明暗各12 h(06:00-18:00)周期, 21-23℃的室温环境中饲养,侧脑室置管后予以单笼饲养。二、侧脑室置管:在水合氯醛麻醉下(400mg/Kg, ip),将大鼠固定在脑立体定位仪上,右侧侧脑室置管(Bregma点后0.8mm,右1.5mm,从颅骨表面计算插入深度为3.5mm),将2枚不锈钢螺丝固定在套管两侧的颅骨上,玻璃离子水门汀固定。术后大鼠自由恢复7天。三、分组及给药:将大鼠随机分为6组,分别侧脑室注射nesfatin-1(0.05μg/只)、nesfatin-1(0.5μg/只)及等量的灭菌水(5μl/只),阴茎背静脉注射nesfatin-1(10μg/kg)、nesfatin-1(50μg/kg)及等量的灭菌水(150μl/只),每组6只。四、胃液收集:采用幽门结扎法收集胃液。大鼠乙醚短暂麻醉,沿腹中线剑突下切开一小口,暴露幽门,沿幽门括约肌丝线结扎,丝线缝合腹壁,给予侧脑室及外周静脉注射,大鼠注射后约5分钟清醒,自由活动。3小时后过量乙醚麻醉处死大鼠,迅速取胃,沿胃大弯剪开胃壁,收集胃液,胃组织-80℃冰箱速冻,留作H~+-K~+-ATPase mRNA表达检测。五、胃酸分泌量检测:测量胃液分泌量后,取1ml胃液,以1%酚红为指示剂,用0.01mol/L NaOH滴定至PH值为7.0,胃液量乘以胃液酸的浓度即为胃酸分泌量。六、RT-PCR检测各标本H~+-K~+-ATPase mRNA表达。【结果】一、侧脑室注射nesfatin-1(0.05μg/只及0.5μg/只)后大鼠3h胃液的分泌量分别为2.4±0.3 ml/3h、2.5±0.3 ml/3h,与对照组(3.3±0.3 ml/3h)相比,其分泌量明显减少,差异具有统计学意义(P <0.05,n=6)。二、侧脑室注射nesfatin-1(0.05μg/只及0.5μg/只)后大鼠3h胃酸的分泌量分别为373.6±61.5μmol/3h、380.0±55.8μmol/3h,与对照组(582.7±59.3μmol/3h)相比,其分泌量明显减少,差异具有统计学意义(P <0.05,n=6)。三、外周静脉注射nesfatin-1(10μg/kg及50μg/kg)后大鼠胃液分泌量分别为3.3±0.4ml/3h、3.8±0.5ml/3h,与对照组(3.7±0.7ml/3h)相比差异无统计学意义(P >0.05,n=6)。四、外周静脉注射nesfatin-1(10μg/kg及50μg/kg)后大鼠胃酸分泌量分别为573.8±97.4μmol/3h、594.4±121.0μmol/3h,与对照组(647.6±102.8μmol/3h)相比差异无统计学意义(P >0.05,n=6)。五、侧脑室注射nesfatin-1(0.05μg/只及0.5μg/只)后3h大鼠胃H~+-K~+-ATPase mRNA表达明显下调(P <0.05)。六、外周静脉注射nesfatin-1(10μg/kg及50μg/kg)后3h大鼠胃H~+-K~+-ATPase mRNA表达与对照组相比差异无统计学意义(P >0.05)。【结论】Nesfatin-1通过中枢注射可以明显抑制大鼠胃酸的分泌。