复方莪术汤对子宫内膜异位症大鼠模型Th1/Th2平衡的调节作用

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目的:采用自体移植法制作子宫内膜异位症大鼠模型(Endometriosis, EMT),观察复方莪术汤(Compound Curcuma Decoction, CCD)对EMT模型大鼠在位和异位内膜组织形态学和外周血分化抗原簇3、4、8(cluster of differentiation antigen, CD3, CD4, CD8)的影响;同时观察CCD对EMT模型大鼠外周血辅助性T细胞(helper T cells)1与辅助性T细胞2的比值(Th1/Th2)平衡的调节作用;从免疫调节的角度探讨复方莪术汤的治疗机理,为复方莪术汤的临床应用提供更多的实验依据。方法:选用健康雌性未交配过的Wistar大鼠70只,采用不检测动情期、自体移植法制作大鼠子宫内膜异位症模型。建模4周后再次开腹,根据模型移植物生长情况选择纳入与排除,将成模无差别的大鼠称重后随机分为4组:模型对照组、复方莪术高剂量组(HCCD)、复方莪术低剂量组(LCCD)、孕三烯酮组。同时设置正常对照组。分别给药4周后,第三次剖腹,检测移植物体积和重量,光镜下观察组织形态,采用流式细胞分析技术测定EMT模型大鼠外周血分化抗原簇3、4、8(CD3, CD4, CD8)及CD4/CD8,同时测定EMT模型大鼠外周血辅助性T细胞1与辅助性T细胞2的比值(Th1/Th2)。数据用A±S表示,实验结果采用SPSS17.0软件系统进行统计学分析,两两比较用独立样本t检验,多组间数据比较用完全随机设计方差分析,组间均值两两比较用Students-Newman-Keuls(SNK)法。以P<0.05表示差异具有统计学意义。结果:1、建模4周后第2次开腹可见:生长良好的异位病灶表现为隆起的囊泡结构,囊内有清亮的液体积聚。部分异位病灶被结缔组织覆盖且有血管形成。病理学检查可见子宫内膜上皮细胞、腺体和间质。不检测动情期、自体移植法制作EMT大鼠模型的成模率为80%。第2次开腹,各组移植物体积和重量与模型对照组比较无明显差异(P>0.05)。给药4周后,第3次开腹各治疗组移植物体积缩小,与模型对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05);CCD组与孕三烯酮组比较,移植物体积无明显差异(P>0.05)。2、从组织形态学来看,与模型对照组比较,各治疗组异位内膜组织可见不同程度萎缩,腺体数目减少且面积缩小,被覆上皮变薄,上皮细胞呈低柱状甚至扁平状松散排列,间质细胞明显减少,血管数目减少。3、EMT模型大鼠外周血CD3, CD4明显低于空白对照组(P<0.05),CD4/CD8较空白对照组下降(P<0.051,CD8有下降趋势,但差异无统计学意义;各治疗组与模型组比较,CD3, CD4, CD4/CD8上升,差异具有统计学意义(P<0.05):CCD组与孕三烯酮组比较,CD3, CD4, CD4/CD8差异无统计学意义。4、EMT模型大鼠与空白对照组比较,外周血CD4+IL-4+上升(P<0.05),Th1/Th2下降(P<0.05),CD4+IFN-γ+无明显变化;复方莪术汤组与模型组比较,CD4+IL-4下降,Th1/Th2上升,差异具有统计学意义(P<0.05);CCD组与孕三烯酮组比较,CD4+IL-4, Th1/Th2无统计学差异。结论:1、CCD可抑制大鼠子宫内膜异位症的发展,减小移植物体积,减轻腹腔粘连,改善异位内膜组织形态学的变化,其中以HCCD组作用明显。2、证实EMT模型大鼠存在免疫功能异常,外周血CD3, CD4, CD8, CD4/CD8均下降,CCD可调节EMT模型大鼠T淋巴细胞亚群的异常状态,以HCCD作用明显。3、EMT模型大鼠外周血CD4+IL-4+上升,CD4+IFN-γ+无明显变化,Th1/Th2下降,CCD可调节EMT模型大鼠Th1/Th2失衡状态。
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