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选题依据:中药款冬花为菊科植物款冬(Tussilago farfara L.)的干燥花蕾,主要用来治疗喘咳痰多、久咳不愈、急慢性气管炎等症。款冬花主要含黄酮、苯丙素、倍半萜、三萜以及生物碱等物质,具有抗炎,抗氧化,抗过敏等作用。本课题组研究发现,款冬花水提物具有止咳化痰的功效,款冬花石油醚提取物具有干预过敏性哮喘的活性。已有研究表明,款冬花总倍半萜具有抗炎作用。本研究在前期研究基础上将进一步分析款冬花石油醚部位中特征性成分倍半萜对卵清蛋白(OVA)致敏的过敏性哮喘大鼠的干预作用;并采用代谢组学技术分析其干预机制。目的:分析款冬花总倍半萜对OVA致敏的过敏性哮喘大鼠的干预作用及其作用机制。方法:(1)款冬花总倍半萜的制备:利用中压制备对款冬花石油醚部位中的总倍半萜类物质进行分离与富集,并考察不同型号FLASH柱对款冬花总倍半萜制备的影响;采用NMR技术对款冬花总倍半萜类成分进行定性分析;采用HPLC测定款冬花总倍半萜的含量。(2)款冬花总倍半萜对OVA致敏的过敏性哮喘大鼠的干预作用:本文以款冬花总倍半萜为实验材料,利用OVA致敏的过敏性哮喘大鼠模型,通过血清生化指标、肺及支气管病理切片、支气管肺泡灌洗液(BALF)炎症细胞计数技术来分析款冬花总倍半萜对OVA致敏的过敏性哮喘大鼠的干预作用。(3)款冬花总倍半萜对OVA致敏的过敏性哮喘大鼠的干预机制:采用液质代谢组学技术找到相关代谢物及其代谢通路。采用Western blot技术对上述实验动物肺组织p65 NF-kB蛋白表达量进行分析,寻找款冬花总倍半萜对OVA致敏哮喘大鼠的干预通路。结果:(1)款冬花总倍半萜的制备。选用Angle C 18 FLASH柱(20 g,20-35μm),以85%的甲醇为流动相,中压制备色谱在线洗脱,等度洗脱35 min。收集5-35 min的流分,减压浓缩即得款冬花总倍半萜。利用NMR定性分析总倍半萜部位,脂肪酸杂质较少,和石油醚部位相比经过中压制备后款冬花总倍半萜得到了富集。其中款冬酮纯度较石油醚部位提高约10倍。(2)款冬花总倍半萜对OVA致敏的过敏性哮喘大鼠的干预作用。款冬花总倍半萜可以减轻肺部炎症细胞浸润,改善支气管的增生与变形,有效地回调血清中s OVA-Ig E、IL-4、IL-13等炎症因子的水平,缓解哮喘症状。(3)款冬花总倍半萜对OVA致敏的过敏性哮喘大鼠的干预机制。款冬花总倍半萜可以影响精氨酸、精胺、苯丙氨酸、前列腺素E1、前列腺素E2、EPA等内源性代谢物水平,干预精氨酸和脯氨酸代谢通路等5条显著变化通路,对大鼠哮喘起到调节作用,同时也可以下调p65 NF-kB蛋白表达量,阻断促炎因子向胞内信号的传导,抑制炎症因子释放,减轻炎症。结论:本文通过中压制备建立了款冬花总倍半萜制备方法,但其制备工艺还需进一步的摸索。通过OVA致敏的哮喘大鼠动物模型验证了款冬花总倍半萜具有干预过敏性哮喘的作用。采用液质代谢组学技术找到相关代谢物及其代谢通路,款冬花总倍半萜可以干预机体代谢平衡,同时抑制p65 NF-kB蛋白过度表达,阻断促炎因子向胞内信号的传导,抑制炎症因子释放,减轻炎症。