选题依据:在中医的诸多证型中,肾阳虚证较为常见,最早收录于《黄帝内经》。肾阳虚证是虚寒症候,临床多表现为畏寒怕冷、夜尿频多、性欲衰减等。随着现代医学的发展,肾阳虚证被认为与下丘脑-垂体-靶腺轴(肾上腺、甲状腺、性腺)密切相关。龟龄集起源于明代,包含二十余味药材,采用升炼技艺,是我国的著名养生名方,有强身补脑、固肾补气、增进食欲的功效。查阅相关文献,关于龟龄集的研究多集中于勃起功能障碍、衰老等,关于肾阳虚证的研究主要集中在临床应用,而相应的药理研究却较少。因此,为了龟龄集的深入研究和临床应用,本研究对龟龄集改善肾阳虚证模型大鼠的药理作用和基于高效液相色谱-质谱联用(LC-MS)的代谢组学机制进行探讨,分析其对代谢物和代谢通路的调控作用。目的:明确龟龄集对肾阳虚证模型大鼠的药理作用,并结合LC-MS代谢组学技术探讨其对代谢物和代谢通路的调控作用,以期为龟龄集的临床应用提供科学依据。方法:1、以大剂量注射氢化可的松复制大鼠肾阳虚证模型。将大鼠随机分为对照组、模型组、龟龄集低剂量组(37.5 mg/kg)、中剂量组(75 mg/kg)、高剂量组(150 mg/kg)和阳性药(金匮肾气丸)组,连续给药30天。利用行为学、病理切片、生化指标评价龟龄集对肾阳虚证模型大鼠的药理作用。2、基于LC-MS代谢组学技术,研究龟龄集对肾阳虚证模型大鼠的血清、肾上腺、睾丸的代谢轮廓的的影响,分析龟龄集对肾阳虚证模型大鼠血清和靶组织(肾上腺、睾丸)的相关生物标志物的调节水平,结合多元统计分析方法从代谢物角度探讨龟龄集对肾阳虚证模型大鼠的改善作用。3、分析龟龄集调节的生物标志物的相关代谢通路,探讨龟龄集对肾阳虚证相关代谢通路的改善作用。结果:1、药理作用结果:与对照组相比,模型组大鼠呈现出消瘦、竖毛、毛色暗淡、躬背等现象,其体重、穿越格数、直立次数、血清激素水平均显著下降(P<0.05),表明大鼠肾阳虚证模型造模成功。龟龄集干预后能显著增加肾阳虚证模型大鼠的体重、旷场穿越格数、血清激素的水平。2、血清代谢组学结果:多元统计分析结果显示空白对照组与肾阳虚证模型组、龟龄集各给药组与肾阳虚证模型组均呈现清楚可见的分开趋势,表明龟龄集可以调控肾阳虚证模型大鼠的血清代谢轮廓。血清代谢组学共鉴定了 22个与肾阳虚证相关的血清生物标志物,龟龄集干预后对21个代谢物有回调作用,其中7个代谢物可显著回调(P<0.05),分别为 LPC(20:4)、PC(0:0/18:1)、LPC(18:2)、LPC(20:0)、Platelet-activating factor、L-leucine、Oleamide。推测龟龄集可调节由肾阳虚证引起的缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的生物合成、醚酯代谢、初级胆汁酸的生物合成等代谢途径的紊乱。3、肾上腺代谢组学结果:多元统计分析结果显示空白对照组与肾阳虚证模型组、龟龄集各给药组与肾阳虚证模型组均呈现清楚可见的分离趋势,表明龟龄集可以调控肾阳虚模型大鼠肾上腺代谢轮廓。肾上腺代谢组学鉴定了 19个与肾阳虚证相关的肾上腺组织生物标志物,龟龄集干预后对15个代谢物有显著回调作用(P<0.05),分别为脂质、核苷酸、维生素类化合物,推测其可能通过调节鞘脂代谢、嘌呤代谢、花生四烯酸代谢和烟酸和烟酰胺代谢等通路发挥对肾阳虚证模型大鼠的改善作用。4、睾丸代谢组学结果:多元统计分析结果显示空白对照组与肾阳虚证模型组、龟龄集各给药组与肾阳虚证模型组均呈现清楚可见的分开趋势,表明龟龄集可以调节肾阳虚证模型大鼠睾丸代谢轮廓。睾丸代谢组学鉴定了 31个与肾阳虚证相关的睾丸组织生物标志物,龟龄集干预后对26个代谢物有显著回调作用(P<0.05),分别为脂质、核苷酸、维生素、氨基酸类化合物,推测其可能通过调节谷胱甘肽代谢、乙醛酸和二羧酸代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、TCA循环、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的生物合成、醚脂代谢、鞘脂代谢等代谢通路发挥对肾阳虚证模型大鼠的改善作用。结论:龟龄集对肾阳虚证模型大鼠有改善作用,血清代谢组学与靶组织代谢组学具有整体性和系统性,并相互补充、佐证,结果显示其可能通过调节脂质代谢、氨基酸代谢、维生素代谢、核苷酸代谢等发挥作用,涉及改善激素合成、能量稳定和氧化平衡发挥作用。