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1、研究背景和目的秦艽与龙胆同属龙胆科龙胆属植物,目前的研究发现,二者的化学成分虽有较大相似性,但临床药效不同。现行2015年版《中国药典》中,栎瘿酸作为定性鉴别的特征性成分,虽可以达到与龙胆药材区别的目的,但对于口服方式为水煎液的制剂,无法实现从药材到制剂的质量传递。针对秦艽药材质量标准中存在的问题,本课题将从秦艽中寻找和发现新的特征性成分,期望通过建立的薄层鉴别方法达到不但能与龙胆区别也能满足与秦艽伪品的鉴别,建立的HPLC含量测定的定量分析方法,满足对秦艽药材的品质评价,完善现行标准中秦艽药材质控方面存在的问题,为秦艽药材质量标准的提升提供试验依据。2、研究方法（1）秦艽特征性成分的选择与分离基于建立的HPLC指纹图谱,通过分析比较秦艽和龙胆不同极性部位中化学成分的差异,锁定秦艽中的专属性成分,利用大孔树脂、硅胶、凝胶等柱色谱分离技术,对目标成分进行跟踪分离、鉴定及富集;对获得的目标物2-甲氧基鳝藤酸（MAA）,采用超高效液相串联质谱（UPLC/MS）和薄层色谱（TLC）等方法进行专属性研究。采用生物自显影实验方法和DPPH试剂,考察MAA和2-羟基鳝藤酸清除氧自由基的能力;以脂多糖（LPS）诱导巨噬细胞,建立炎症模型,依据炎症因子NO释放量评价目标物的抗炎作用,来对MAA和2-羟基鳝藤酸的活性进行初步筛选。（2）秦艽的质量标准研究以MAA为定性指标,采用石油醚-乙酸乙酯-甲酸（25:20:0.3）为展开剂,5%香草醛硫酸乙醇溶液为显色剂,建立秦艽药材的薄层色谱鉴别方法;以MAA为指标,Unitary C18柱为色谱柱、乙腈-0.1%磷酸水溶液（V/V）为流动相,建立秦艽的HPLC定性鉴别方法。建立秦艽的HPLC指纹图谱分析方法,并运用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”（2004版）对样品进行相似度分析,运用SIMCA 13.0软件对指纹图谱结果进行判别分析（PLS-DA）与聚类分析（HCA）;确定秦艽共有特征峰,建立秦艽的特征图谱鉴别方法;以MAA作为指标,以Unitary C18（250*46mm,5μm,100A）柱为色谱柱、乙腈-0.1%磷酸水溶液（42:58,V/V）为流动相,建立秦艽药材的HPLC含量测定定量方法。采用SPSS软件,对样品中MAA含量结果与现行药典指标（龙胆苦苷和马钱苷酸）测定结果进行相关性分析。3、研究结果（1）秦艽特征性成分的选择与分离从秦艽药材的水煎液中发现了一个新的特征性成分,经分离鉴定为2-甲氧基鳝藤酸（MAA）,制备到纯品约100 mg,同时分离得到7个已知化合物,分别为龙胆苦苷、红白金花内酯、丁香树脂酚、大叶苷A、大叶苷B、鳝藤酸和2-羟基鳝藤酸。经UPLC/MS及TLC分析,结果表明,2-甲氧基鳝藤酸为秦艽4个种的共有成分,专属性强,在秦艽的水煎液、配方颗粒中均能检测到,具有从药材到制剂的质量传递作用,且能将秦艽与龙胆、秦艽伪品（尖齿糙苏PDF、黄秦艽VBF、红秦艽SPM）进行有效鉴别。抗氧化试验结果显示,MAA和2-羟基鳝藤酸有一定的清除自由基能力,但较阳性药抗坏血酸（Vc）弱;抗炎试验结果显示,阳性药组与模型组中NO的含量具有显著性差异（P<0.01）,阳性药具有抗炎活性,而样品组与模型组无显著性差异。（2）秦艽的质量标准研究建立了秦艽的薄层色谱方法,该方法耐用性较好,秦艽样品中MAA对应的斑点清晰、分离度较好、无干扰。建立了秦艽的指纹图谱,相似度分析结果显示29批秦艽的相似度均值大于0.9,种间整体相似度较高;判别分析（PLS-DA）和聚类分析（HCA）结果显示秦艽和龙胆及秦艽伪品（尖齿糙苏、黄秦艽、红秦艽）分别聚集,表明所建立的方法可以实现秦艽与龙胆及秦艽伪品的鉴别,VIP结果显示MAA是最主要的贡献成分;确定了秦艽的5个特征峰,以MAA为参照峰,建立了秦艽的特征图谱分析方法,其方法的精密度、重复性、稳定性良好;建立了秦艽中MAA的HPLC定性鉴别方法。建立了秦艽中MAA的HPLC定量方法,方法学研究表明:MAA在0.8096～202.4μg·m L-1线性关系良好,其标准曲线为y=49.263x-32.089,R2=0.9999;MAA平均加样回收率为99.56%,RSD为2.29%;方法的精密度、重复性、稳定性试验RSD均小于3%,表明建立的HPLC含量测定方法满足分析实验要求。4、结论从秦艽中共分离得到8个已知化合物,分别为龙胆苦苷、大叶苷A、大叶苷B、2-甲氧基鳝藤酸（MAA）、2-羟基鳝藤酸、鳝藤酸、丁香树脂酚和红白金花内酯。MAA类成分具有一定的抗氧化和抗真菌活性。由于MAA专属性较强,在定性鉴别中,建议MAA替代栎瘿酸或者与其共同作为薄层鉴别的指标成分;建立的特征图谱或HPLC鉴别均可用于秦艽药材与龙胆及其秦艽伪品的鉴别;在定量方面,因MAA与环烯醚萜类成分在秦艽中的含量相关性较好,建议二者共同用于秦艽药材质量评价,使得秦艽药材的质量标准从定性和定量两方面得到一定的提升。