背景与目的胎粪吸入综合征(Meconium aspiration syndrome,MAS)是指新生儿在子宫内或产时吸入胎粪污染的羊水,导致气道阻塞及全身炎症反应,可累及全身各个脏器及系统,症状因羊水污染程度及吸入的羊水量而表现不同。MAS发病机制复杂,尚未完全明确,重症MAS并发症多,治疗困难,故MAS仍是产科医师及新生儿科医师重点关注疾病。细胞死亡是生命现象不可逆停止以及生命的结束,是细胞代谢的生物学过程,与细胞生长、增殖、分化一样都受到机体调控。前期实验证明:胆酸可诱导A549细胞死亡,低浓度胆酸诱导细胞凋亡,高浓度的胆酸诱导坏死性凋亡。但其具体的作用机制如何?我们将采用人肺癌上皮细胞株A549细胞作为工具细胞,A549细胞与肺泡上皮细胞功能相似,进一步探讨肺损伤因素如胎粪、胆酸等如何诱导细胞死亡。法尼醇X受体(Farnesoid X Receptor,FXR)是几个代谢途径的重要监管者。FXR作为一种胆汁酸受体和胆汁酸生物合成的生物感受器,有助于影响胆汁酸在新陈代谢、炎症及细胞周期控制中的作用。近年来,多项临床研究发现FXR在急性肺损伤(Acute Lung Injury,ALI)/急性呼吸窘迫综合征(Acute Respiratory Distress Syndrome,ARDS)发生中发挥重要作用,但原因不清楚。前期有研究中发现FXR可能作为胆酸的核受体介导了胆酸诱导肺泡上皮细胞(Alveolar Epithelial Cells,AEC)死亡和抑制PS分泌的作用。具有调节炎症及保护内皮细胞功能的FXR为何在新生儿呼吸系统疾病中发挥损伤放大效应,其机制有待深入研究。方法第一部分:通过气管插管,气管内注入胎粪制备新生大鼠胎粪吸入综合征的动物模型;第二部分:采用不同浓度胎粪混悬液刺激A549细胞,检测细胞凋亡及坏死情况,并采用Wester blot免疫印迹法、SDS-PAGE凝胶电泳法测定经胎粪刺激后的肺组织及细胞FXR及RIPK3的表达。探索FXR在新生大鼠胎粪吸入综合征发病机制中的作用;第三部分:临床选择机械通气新生儿,分为肺源性插管患者组、非肺源性插管患者的对照组,收集肺泡灌洗液细胞行流式细胞学检查,分析肺泡细胞死亡比例及类型。结果(一)气管导管内注入胎粪混悬液2ml/kg的MAS组出现了相应的肺损伤。(二)1.A549细胞经过不同浓度的胎粪刺激后,细胞死亡比例明显增加,呈浓度依赖性,胎粪混悬液浓度越高,A549细胞死亡比例越高。2.MAS与C组和NS组比较,MAS组动物肺组织FXR及RIPK3蛋白表达水平有增加趋势。3.不同浓度胎粪刺激A549细胞后,FXR、RIPK3的蛋白表达水平增加。(三)1.肺源性气管插管组细胞死亡平均数为25%(凋亡21%)左右,非肺源性插管患者细胞死亡平均数为5%左右。2.肺源性气管插管组血液中IL-6的平均值为533,明显高于非肺源性插管患者。结论1.通过气管导管内注入胎粪混悬液2ml/kg可成功制作胎粪吸入综合征模型,为研究胎粪吸入综合征及其相关疾病提供更好的动物模型。2.胎粪可诱导A549细胞死亡比例增加,呈浓度依赖性,20mg/ml组刺激24小时为最适浓度组,细胞死亡比例在39%左右。随着胎粪混悬液浓度的增加,FXR、RIPK3的蛋白表达水平明显增加。3.肺源性气管插管组患者中,细胞死亡比例明显大于非肺源性气管插管患者,且死亡方式以凋亡为主。