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目的本实验室已有的研究表明,甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)对于糖尿病肾病的进展有着双重的作用,短期处理会抑制转化生长因子(TGFβ)信号通路,但长期处理则会失去抑制TGFβ信号通路的作用,甚至还通过激活TGFβ通路,促进糖尿病肾病的进展。ROS与炎症分子在糖尿病肾病的进展过程中发挥重要作用,但是PTHrP是否对ROS与炎症分子的生成有调控作用尚不清楚。本论文通过培养肾小球系膜细胞和建立链脲佐菌素诱导的大鼠1型糖尿病肾病模型,探讨PTHrP是否通过ROS和炎症分子来参与糖尿病肾病的发病过程。方法 1.采用PTHrP的氨基末端短肽PTHrP(1-34)100 nmol/L刺激系膜细胞1-24小时,然后裂解细胞并提取总蛋白,Western blot分别检测NADPH氧化酶亚基p47phox和炎症分子IL-1β、TNFα的蛋白表达水平。2.采用高浓度葡萄糖(30 mmol/L)刺激系膜细胞1-24小时,然后裂解细胞并提取总蛋白,Western blot分别检测p47phox、IL-1β和TNFα的蛋白表达水平。3.观察PTHrP(1-34)对于高糖诱导NADPH氧化酶亚基p47phox和IL-1β、TNFα的表达上调是否有影响。具体实验安排为:首先加PTHrP 100 nmol/L预处理系膜细胞30分钟,然后分别进行高糖处理1、3、6小时和24小时。4.建立链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠模型,分为正常组、糖尿病组、小剂量PTHrP(1-34)给药组(40μg/kg)、中剂量PTHrP(1-34)给药组(80μg/kg)和大剂量PTHrP(1-34)给药组(160 μg/kg)。分别取PTHrP(1-34)给药15天、90天的肾皮质研磨,随后裂解并提取总蛋白,采用Western blot检测不同剂量PTHrP处理15天和90天的大鼠肾皮质p47phox、IL-1β和TNFα的表达是否有变化。5.同上建立链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠模型,采用免疫组化的方法检测IL-1β和TNFα的表达是否有变化。结果 1.高糖刺激系膜细胞3小时p47phox的蛋白表达开始升高;PTHrP(1-34)处理系膜细胞6小时可诱导p47Phox的蛋白表达升高。2.高糖刺激系膜细胞6小时IL-1β的蛋白表达开始升高;PTHrP(1-34)处理系膜细胞12小时可诱导IL-1β的蛋白表达升高。3.高糖刺激系膜细胞1小时TNFα的蛋白表达开始升高;PTHrP(1-34)处理系膜细胞3小时可诱导TNFα的蛋白表达升高。4.PTHrP(1-34)预处理可抑制高糖处理3小时诱导的p47phox上调,不能抑制高糖处理24小时诱导的p47phox表达升高。PTHrP(1-34)预处理不能抑制高糖处理6小时和24小时诱导的IL-1β上调。PTHrP(1-34)预处理可抑制高糖处理1小时诱导的TNFα上调,但不能抑制高糖处理24小时诱导的TNFα表达升高。5.不同剂量的PTHrP(1-34)处理15天可抑制糖尿病大鼠肾皮质p47phox、IL-1β和TNFα的蛋白表达上调,且存在剂量依赖性;但是PTHrP(1-34)给药3个月不能抑制大鼠肾皮质p47phox、IL-1β和TNFα的蛋白表达上调。结论PTHrP(1-34)短期给药可抑制糖尿病大鼠肾皮质p47phox的表达来降低NADPH氧化酶NOX1和NOX2的活性,减少ROS产生;并抑制炎症因子IL-1 β和TNFα的表达上调。PTHrP(1-34)长期给药不能抑制糖尿病大鼠肾皮质NADPH氧化酶的活性和炎症因子IL-1β和TNFα的表达上调。这与前期发现的PTHrP(1-34)对TGFβ信号通路的双重作用类似,说明PTHrP在糖尿病肾病的发病过程中存在着不依赖于高血糖的调控机制。