论文部分内容阅读
目的:本研究通过高脂饲料喂养联合小剂量STZ腹腔注射获得糖尿病大鼠模型。观察低频电针糖尿病大鼠“中脘”穴即时降糖的效果,及糖尿病大鼠股静脉注射纳洛酮后低频电针“中脘”穴的效应和下丘脑内即刻早期基因c-fos及CRH蛋白表达的影响,探讨血浆内β-内啡肽在降糖过程中的机制及即时降糖过程中神经-内分泌中枢调节可能的机制。方法:180g~220g wistar雄性大鼠34只,按照随机数字法分为正常组(n=13)和模型组(n=21),分别喂以基础饲料(总热量为3.8kcal/g,含70%碳水化合物,20%蛋白质,10%脂肪)及高脂饲料(总热量为5.4kcal/g,含38.5%碳水化合物,15%蛋白质,46.5%脂肪)。大鼠喂养6周后,禁食不禁水12h,模型组大鼠一次性低剂量注射链脲佐菌素(STZ)30mg/kg,正常组大鼠注射等体积柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液进行对照,72h后随机测量模型组和正常组大鼠空腹血糖,若模型组大鼠空腹血糖值大于11.1mmol/l,即成功制备糖尿病大鼠模型。造模成功后,模型组(n=21)分为模型对照组(n=5),模型电针组(n=8)及模型电针纳洛酮组(n=8);另有正常组(n=13)分为正常对照组(n=5)及正常电针组(n=8)。所有电针组均采用0.30mm*25mm不锈钢毫针,直刺“中脘”穴3~5mm,捻转1min,无关电针透皮即可,采用HANS LH202H型电针治疗仪,各针刺组正极接无关电极,负极接“中脘”穴,连续波,频率2Hz,强度1mA,通电30min,仅治疗一次。治疗前,用快速血糖仪测空腹尾静脉血糖及一侧股静脉血糖,按上述方法治疗30min分钟后,再次取尾静脉血测即时血糖及另一侧股静脉血糖。将治疗前后所取得的股静脉血用酶联免疫检测法(ELISA)检测血浆胰岛素及β-内啡肽的含量,并对数据进行统计分析。用4%多聚甲醛对大鼠进行灌注内固定后取全脑,采用免疫组织化学法检测各组大鼠下丘脑内CRH及c-fos蛋白的表达,运用图像分析系统检测CRH及c-fos蛋白阳性表达物灰度值(吸光度),并对数据进行统计分析。结果:1.经6周喂养,高脂喂养组大鼠体重增长明显,与正常组对比,有非常显著的差异(p<0.01)。2.喂养6周后,模型组大鼠在空腹状态注射STZ30mg/kg,72h后测得模型大鼠空腹血糖值均大于11.1mmol/l,则成功制备糖尿病大鼠模型。3.低频电针“中脘”穴治疗糖尿病大鼠,各组针刺后血糖值较针刺前血糖值有不同幅度的降低,具有统计学意义(p<0.05)。通过实验观察到,不仅模型电针组血糖值降低,而且正常电针组也有所降低。4.低频电针“中脘”穴后,各针刺组大鼠血浆内胰岛素及β-内啡肽比针刺前的含量有所提高,具有统计学意义(p<0.05)。5.模型电针纳洛酮组大鼠股静脉注射纳洛酮后,与模型电针组比较后发现低频电针“中脘”穴即时降糖效应减弱。6.低频电针“中脘”穴,模型电针组、模型电针纳洛酮组及正常电针组治疗后与模型组及正常组进行比较发现,大鼠下丘脑内CRH及c-fos蛋白表达增多,具有统计学意义(p<0.05)。结论:1.经高脂饲料喂养6周联合小剂量腹腔注射STZ,成功制备出糖尿病大鼠模型。2.低频电针“中脘”穴不仅具有即时降糖尿病大鼠血糖的作用,还具有降低正常大鼠血糖的作用。3.低频电针“中脘”穴可以升高外周胰岛素及β-内啡肽的水平,纳洛酮阻断β-内啡肽的作用使电针“中脘”穴的即时降糖效应完全受抑,提示了β-内啡肽参与了电针即时降糖效应。4.低频电针“中脘”穴可以增加下丘脑内CRH及c-fos蛋白的表达水平,这可能与降糖的神经-内分泌中枢机制相关。