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目的通过观察HSP患儿血清IgA1和正常儿童血清IgA1对体外培养的HUVECs凋亡诱导作用，及其对P53、Bax、Bcl-2和Caspase-3表达的影响，探讨IgA1诱导内皮细胞凋亡的分子机制，为明确IgA1在HSP血管损伤中的作用提供实验依据。方法1.血清采集及IgA1的分离提取2010年9月-2011年1月在本院儿科住院明确诊断HSP的初发患儿10例，10名与HSP患儿同时期、同地区无风湿免疫性疾病史的门诊健康体检儿童作为正常对照。所有受试患儿清晨空腹采取外周静脉非抗凝全血5ml，分离血清。亲和层析法分离提取血清IgA1。2.实验分组用含10%胎牛血清（FBS）的RPMI-1640常规培养HUVECs，依据培养条件不同分为3组：①HSP组：用含不同浓度（0.05mg/ml、0.1mg/ml、0.25mg/ml）HSP患儿血清IgA1的RPMI-l640培养；②正常对照组：用含不同浓度（0.05mg/ml、0.1mg/ml、0.25mg/ml）正常儿童血清IgA1的RPMI-l640培养；③空白对照组：用不含IgA1的RPMI-l640培养。3.细胞凋亡的观察与检测光学显微镜下观察IgA1诱导前后各组HUVECs形态学变化；各组于诱导因素加入后12h和24h分别收集一次细胞，行流式细胞仪（FCM）和TUNEL法检测细胞凋亡率。4.凋亡相关基因检测0.25mg/mlIgA1诱导HUVECs24h时应用实时荧光定量聚合酶链反应（Real time PCR）和蛋白质印记技术（Western blot）检测各组HUVECs中凋亡相关基因P53、Bax、Bcl-2及Caspase-3mRNA及蛋白表达情况。结果1.光学显微镜下观察可见IgA1诱导24h时HUVECs圆缩，体积缩小，与周围细胞脱离，HSP组较正常对照组改变更加明显。2.各组HUVECs诱导培养12h时，HSP组和正常对照组FCM法IgA1为0.25mg/ml，TUNEL法IgA1为0.1mg/ml时，即可诱导内皮细胞发生明显凋亡（P＜0.01），但HSP组与正常对照组比较差异无显著性（P>0.05）。在诱导培养24h时，HSP组和正常对照组IgA1为0.1mg/ml时即可诱导内皮细胞发生明显凋亡（P＜0.01），HSP组凋亡率与正常对照组相比显著增加（P＜0.01），且随着IgA1浓度增加及诱导时间延长，细胞凋亡率逐渐增加（P＜0.01）。3.0.25mg/ml IgA1诱导24h时，HSP组和正常对照组与空白对照组相比，P53、Bax、Caspase-3mRNA表达均明显增多，Bcl-2mRNA表达均明显减少，差异有统计学意义（P<0.05）；HSP组P53、Bax、Caspase-3mRNA表达的增加和Bcl-2mRNA表达的减少较正常对照组变化更为显著（P<0.05）。4.0.25mg/ml IgA1诱导各组HUVECs24h时，HSP组和正常对照组与空白对照组相比，P53、Bax、Caspase-3蛋白表达明显增多，Bcl-2蛋白表达明显减少（P<0.01）；HSP组与正常对照组相比也有显著性差异（P<0.01）。结论1.IgA1可以诱导体外培养HUVECs凋亡，HUVECs凋亡率与IgA1的剂量和作用时间具有一定的量效时效关系，当作用时间及IgA1浓度相同时，HSP患儿血清提取的IgA1对HUVECs的凋亡诱导作用更强。2.IgA1诱导体外培养HUVECs凋亡的机制可能与上调促凋亡基因P53、Bax、Caspase-3表达，下调抑制凋亡基因Bcl-2表达有关。