仿生合成纳米材料应用于ELISA检测Bt蛋白的研究

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bbfyang
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由于转基因技术的日益发展,转基因产品走进了人们的视线。首先技术的安全性问题引起了广泛关注,对转基因产品的监管和安全评价变得尤为重要。所以对于转基因产品高效的检测具有重要的实践意义。仿生纳米材料,是在有机物参与下自组装合成的一类有机-无机杂化纳米材料,该材料合成方法简单,反应条件温和,同时实现材料合成与酶的固定一步完成。该材料因为其特殊的合成化过程和材料性质,在负载酶方面具有广泛的应用。本论文拟采用仿生合成法合成两种有机-无机杂化纳米材料,结合酶联免疫吸附法(ELISA)对苏云金芽孢杆菌(Btillus thuringiensis,Bt)蛋白Cry1Ab检测。本论文具体内容如下:(1)通过仿生合成的方法,制备出中空的管束状酶-水胆矾(EB)有机-无机杂化纳米材料。通过扫描电镜(SEM),透射电镜(TEM),X射线衍射(XRD)等方法对材料形貌和组成进行表征。然后通过优化,得到最佳反应条件分别为:链霉亲和素标记的辣根过氧化物酶(SA-HRP)用量为10μg,生物素标记的二抗(biotin-conjugated secondary antibody,BCSA)用量为5μg、材料稀释倍数为15倍、缓冲溶液p H值为7.0、材料孵育时间为20 min,结果显示,该方法特异性好,线性范围为0-12.5 ng/m L,检测限为0.11 ng/m L。(2)利用仿生合成的策略,将酶分子固载到金属有机框架ZIF-8中,构建SA-HRP@ZIF-8纳米复合材料。通过扫描电镜(SEM),透射电镜(TEM),X射线衍射(XRD)等方法对材料形貌和组成进行表征。然后通过优化,得到最佳反应条件分别为:链霉亲和素标记的辣根过氧化物酶(SA-HRP)用量为20μg,BCSA稀释倍数为10000倍、材料稀释倍数为10倍、缓冲溶液p H值为7.0、材料孵育时间为30 min,结果显示,该方法特异性好,线性范围为0-6.25 ng/m L,检测限为0.10ng/m L。
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