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目的:胃癌(gastric cancer,GC)世界范围内发病率居第四位,死亡率高居肿瘤相关死亡的第二位。胃癌患者早期大多缺乏特异性症状,导致早期诊断率较低,大多数患者首次确诊时已属于局部晚期甚至远处转移,失去了手术切除的机会。同时,胃癌复发率高,容易远处转移,而传统放、化疗效果欠佳,因此总体预后较差,远处转移者中位生存期不足12个月。目前,胃癌的治疗手段仍然以手术、化疗、放疗为主,而在其它肿瘤中如火如荼的靶向治疗及免疫治疗在胃癌治疗中对于改善患者生存作用有限。因此,关于胃癌发生、发展的分子机制研究对于早期诊断、开发新的治疗靶点以更好的改善胃癌患者的生存时间和质量具有重要意义。受体型蛋白磷酸酶(protein tyrosine phosphatase receptors,PTPRs)理论上可以通过去磷酸化抑制相关的肿瘤信号转导通路而阻滞肿瘤的恶性生物学进程。CD148,又被称为PTPRJ,可以通过去磷酸化多种肿瘤发生发展过程中的关键分子,如EGFR,ERK1/2,VEGFR,Src等,影响肿瘤信号通路转导并产生相应的生物学效应。之前的研究显示,CD148可以抑制结肠癌细胞的增殖和转移,抑制乳腺癌、甲状腺癌细胞等的生长。但也有报道CD148也具有促进乳腺癌细胞转移等促肿瘤作用。而CD148在胃癌中的表达及其与胃癌发生、发展的关系尚未见相关报道。关于CD148在肿瘤中异常表达的机制也尚不十分清楚,有文章报道miRNA-328和miRNA-155可以负向调节CD148表达,从而影响肿瘤形成及进展过程,但CD148在胃癌中表达的调控机制仍有待进一步研究。本实验拟研究CD148在胃癌中的表达、对胃癌细胞恶性生物学行为的调控及下游机制,CD148表达上游调控机制,为开发新的胃癌早期诊断生物标志物和治疗靶点提供新的思路。方法:1、免疫组织化学法检测109例胃癌患者手术标本中CD148表达并与临床病理学特征、无复发生存(Recurrence-Free Survivals,RFS)、总生存(Overall Survivals)进行相关性分析;2、在BGC、MKN45、SGC等胃癌细胞系中通过siRNA、CRISPER/Cas9质粒、过表达质粒构建CD148敲低、敲除、过表达细胞系,并通过western blotting验证;3、体外细胞实验验证CD148敲低、过表达对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响;4、体内动物实验验证CD148敲除对胃癌细胞皮下移植瘤重量、体积的影响;5、蛋白印迹法验证CD148对EGFR磷酸化位点及下游PI3K/AKT和MEK/ERK通路的调控;6、生物信息学分析研究胃癌中CD148表达变化的潜在上游机制。结果:1、胃癌患者中较低的CD148表达与更晚的分期、更多的淋巴结转移、远处转移、脉管侵袭、更差的分化等相关,且与更短的无复发生存、总生存相关;2、在体外细胞实验中,过表达CD148抑制了 SGC胃癌细胞系的增殖、迁移、侵袭等,而敲低CD148促进了BGC和MKN45胃癌细胞系的上述恶性生物学行为;3、体内实验中敲除CD148提高了皮下移植瘤的体积和重量;4、在SGC细胞系中过表达CD148没有显著改变总EGFR表达,但是显著降低了EGFR多位点的磷酸化,包括Y1173、Y1068、Y1092,也抑制了下游的PI3K、AKT、MEK1/2、ERK1/2的磷酸化;在BGC细胞系中敲低CD148没有显著改变总EGFR表达,但是显著促进了包括Y1173、Y1068、Y1092在内的多个位点的EGFR磷酸化,并促进了下游PI3K、AKT、MEK1/2、ERK1/2的磷酸化;裸鼠皮下移植瘤的免疫印迹实验显示,敲除CD148没有显著改变总EGFR表达,但是显著提高了包括Y1173、Y1068、Y1092在内的多个位点的EGFR磷酸化水平,并提高了下游PI3K、AKT、MEK1/2、ERK1/2的磷酸化水平;5、生物信息学分析显示3’UTR特异性的甲基化可能是CD148表达降低的原因,而TET2和TET3是潜在调节因子。结论:胃癌中CD148低表达和更短的RFS、OS相关。CD148通过促进EGFR去磷酸化抑制了下游PI3K/AKT和MEK/ERK通路的激活,进而抑制了胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性生物学行为。CD148是胃癌的一个潜在的预后因子和可能的治疗靶点。