超临界CO2流体提取法提取葛根素及其药效学研究

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目的优选提取葛根中葛根素的最佳提取工艺条件和分离纯化工艺条件;考察葛根提取物对链脲佐菌素(STZ)所致的大鼠的糖尿病肾病肾损伤的保护作用。方法在参考有关文献的基础上,采用超临界CO2流体提取法对葛根中的葛根素进行提取,将葛根粉碎为一定粒度的原料,真空干燥后进行萃取,浓缩后得到粗提物。首先按上述流程分别对萃取过程中的夹带剂(乙醇)浓度、压力、温度、时间进行单因素实验,确定各因素的影响程度,采用正交设计法进一步确定最佳提取条件的组合,每个因素取3个水平,选择L9(34)正交表安排实验。并采取水提取法,超声提取法对葛根素分别进行提取,以葛根素的含量作为指标,比较三种提取方法的优势和弊端,寻求葛根素的最佳提取方法。为指标,对粗提物以葛根素的含量和浸膏率作进行分离纯化,分别采用醇沉法、自然沉降法和高速离心法,通过进行方法比较,寻求最佳的纯化方法。在参考有关文献的基础上,以链脲佐菌素(STZ)所致的糖尿病肾病作为动物疾病模型,以大鼠血糖,24h尿蛋白,肾脏肥大指数,以及肾脏损伤病理形态的变化为指标来评价葛根提取物的药效。结果在比较超临界CO2提取法、水提取法、超声提取法三种方法对葛根素提取含量的不同结果后,选择超临界CO2提取法进行提取。根据直观分析和方差分析结果,在影响提取结果的4个因素中,夹带剂浓度对葛根提取效果的影响最大,是主要影响因素;其次是提取压力和提取时间,温度的影响最小。影响顺序依次为夹带剂浓度>提取压力>提取时间>温度。确定提取葛根素的较优处方为C1B2D3A2。影响因素中温度虽然在45℃是最佳,但是在温度40℃时的结果与其非常接近,出于节省耗能考虑,得到最佳提取工艺,即温度40℃、压力35MPa,提取时间为4.5h,夹带剂浓度为30%。糖尿病组的大鼠血糖、24h尿蛋白明显升高(P<0.01),与糖尿病组相比,葛根提取物治疗组的大鼠血糖、24h尿蛋白明显减低(P<0.05或P<0.01);糖尿病组的大鼠肾肥大指数明显增加,葛根提取物治疗组的大鼠肾脏肥大程度减轻,有统计学差异(P<0.05);糖尿病组的大鼠肾小球变大,毛细血管基底膜增厚,管腔狭窄,肾小球HE染色区扩大,葛根提取物治疗后对上述异常均有不同程度的改善(P<0.05或0.01)。结论以超临界CO2流体提取法(SFE–CO2)提取葛根中的葛根素,可同时完成蒸馏和萃取两个过程,萃取率高,最大程度保留有效成分,选择性好。葛根提取物通过降低血糖、尿蛋白含量、肾脏肥大指数、以及对肾脏病理改变的抑制作用来改善大鼠糖尿病症状。
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