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背景多环芳烃复合物(PAHs)已被世界卫生组织确定为明确的人类致癌物,炼焦过程中产生的焦炉逸散物(COE)主要有害成分为PAHs,目前我国炼焦企业众多,而且呈逐年增多趋势,焦炉工肺癌的防治工作将会更为紧迫,然而,PAHs导致肺癌的机制仍然不十分清楚。人端粒是染色体末端具有保护功能的帽状结构,它由“TTAGGG”重复片段和相关蛋白组成。端粒能避免正常染色体末端被错误地识别为DNA损伤。在正常细胞中,由于DNA复制机制不能完全复制端粒DNA,因此,细胞每分裂一次,端粒就会有一些缩短。端粒酶是细胞内能延长端粒序列从而弥补端粒损失的一种特殊酶。但是在人体内,端粒酶的表达是受严格调控的,事实上,绝大多数体细胞不具有端粒酶活力,因此,在细胞增殖分裂过程中端粒往往会逐渐缩短。其中一些细胞端粒缩短到临界长度,可被认为双链DNA断裂损伤,并引起端粒功能紊乱,产生DNA的严重损伤和广泛的染色体不稳定。端粒功能紊乱在癌症启动和发展中有着非常重要的作用。POT1、TRF1和TRF2是3个主要的端粒相关蛋白,用以调节端粒长度和端粒稳态。因此,该研究选择端粒长度、端粒酶活力,以及POT1、TRF1和TRF2表达等,分析它们在PAHs所致肺癌发展中的作用。
目的探讨端粒稳态失衡在PAHs致肺癌中的作用。
方法:人群流行病学研究选择焦炉作业工人152例为暴露组,非焦炉作业工人125例为对照组,采集清晨空腹静脉血,应用SYBR Green I real time PCR方法检测其外周血白细胞端粒长度、端粒酶活力。体外细胞实验以煤焦沥青烟提取物、二甲基亚砜(DMSO)和生理盐水作用后的BASE-2B细胞为研究对象,应用SYBR Green I real time PCR方法检测端粒长度、端粒酶活力,以及POT1、TRF1和TRF2 mRNA的表达变化;用免疫组化方法研究POT1、TRF1和TRF2的蛋白表达变化。采用管家基因GAPDH作为端粒DNA和端粒酶cDNAPCR检测的归一化内参、TBP作为POT1、TRFl和TRF2 cDNA PCR检测的归一化内参。
结果:人群流行病学研究:COE暴露组外周血白细胞与对照组相比较,以及暴露组的炉顶工组与炉侧工组相比较,端粒DNA相对长度变短、端粒酶相对活力增高,差异均有统计学意义(P<0.01)。体外细胞实验:煤焦沥青烟组第20代和第30代BASE-2B细胞,与DMSO溶剂组和生理盐水组相比较,端粒DNA相对长度显著缩短(P<0.01)、端粒酶相对活力显著增高(P<0.01);POT1、TRF1mRNA和蛋白水平均显著下降(P<0.05)、TRF2 mRNA和蛋白水平显著升高(P<0.05)。3组第10代细胞之间各指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论PAHs可致端粒DNA缩短、端粒酶活力增高、POT1、TRF1表达下调及TRF2表达上调,而使端粒稳态失衡,从而引起染色体不稳定,可能最终导致肺癌。