目的:以免疫印迹法（Western blot,WB）检测曲妥珠单抗敏感的人乳腺癌HER2阳性细胞系（BT474-TS）及曲妥珠单抗耐药的人乳腺癌细胞系（BT474-TR）中HER2受体、Ki-67、Caspase-3、整合素αvβ3、VEGF-A及PI3K/AKT通路相关蛋白表达水平的差异,探索PI3K/AKT抑制剂LY294002逆转BT474-TR乳腺癌细胞曲妥珠单抗耐药的可行性并检测上述蛋白表达水平的变化情况,了解乳腺癌细胞株BT474在耐药前后及逆转耐药前后细胞增殖、相关受体蛋白表达水平的变化,为核医学多模态分子成像监测曲妥珠单抗耐药的发生提供理论基础。材料和方法:采用药物连续诱导法建立曲妥珠单抗耐药的人乳腺癌细胞系BT474-TR（连续处理6个月）。使用CCK-8法检测曲妥珠单抗对BT474-TS和BT474-TR细胞的体外增殖抑制情况,免疫印迹法检测BT474-TS和BT474-TR细胞HER2受体、Ki-67、Caspase-3、整合素αvβ3、VEGF-A及PI3K/AKT通路相关蛋白的表达情况。使用PI3K/AKT抑制剂LY294002处理细胞后以免疫印迹法检测上述蛋白表达。利用统计学软件Graphpad Prism 8.0行统计学分析,两组间比较采用配对t检验、多组间比较采用单因素方差分析,P<0.05认为差别有统计学意义。结果:BT474-TS细胞株经免疫细胞组化验证为HER2受体阳性的细胞株、且受体定位于细胞膜上;经CCK-8细胞毒性实验检测BT474-TS和BT474-TR细胞株的RI值为7.62,BT474-TR为中度耐药。免疫印迹法检测出BT474-TS细胞株中HER2蛋白、Ki-67、P-AKT、VEGF-A的表达量高于BT474-TR细胞株,且差别具有统计学意义（p值分别为0.0012,0.0156,0.0004,0.0015）,而Caspase-3蛋白的表达量低于BT474-TR细胞株（p=0.0201）;Integrinαvβ3的表达量在两种细胞株之间没有明显差异（p>0.05）;利用PI3K/AKT抑制剂LY294002逆转BT474-TR对曲妥珠单抗的耐药,曲妥珠单抗单药治疗组、LY294002单药治疗组及双药治疗组（曲妥珠单抗单+LY294002）中Ki-67表达量较对照组明显下调（p值分别为0.0029、0.0021、0.005）,双药治疗组（曲妥珠单抗单+LY294002）中Caspase-3表达量较对照组及曲妥珠单抗单药治疗组增高（p值分别为0.0269、0.0284）。结论:HER2阳性的人乳腺癌曲妥珠单抗敏感和耐药细胞株之间的HER2蛋白、Ki-67、P-AKT、VEGF-A、Caspase-3等分子表达量有显著差异,为后续人HER2阳性乳腺癌曲妥珠单抗耐药动物模型的多模态分子影像研究提供理论依据。