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目的:探究蒙药苏格木勒-7对卵巢功能低下的治疗作用及机制。（解释说明:蒙药苏格木勒-7以下简称为苏-7,模型加苏格木勒—7低剂量组简称为苏-7低组,模型加苏格木勒—7中剂量组简称为苏-7中组、模型加苏格木勒—7高剂量组简称为苏-7高组）方法1.选取蒙医辩证属赫依偏盛型或赫依巴达干偏盛型90例卵巢早衰及卵巢功能生理性下降期（绝经前期）及绝经后期患者作为对象,按照年龄及诊断分为3个组:①卵巢早衰组②40—50岁绝经前期组③45-55岁绝经后期组。给予苏-7治疗2-3个月,采用自身用药前后对照法比较治疗前后月经变化、临床症状变化、性激素水平变化来判定临床总疗效。为后期作用机理研究奠定基础。2.基于病人血清蛋白质组学探讨苏-7治疗卵巢功能低下的机制。方法:按照卵巢功能低下诊断标准及纳入标准选择蒙医辩证属赫依偏盛型或赫依巴达干偏盛型卵巢功能低下病人分别给予蒙药苏格木勒-7 15粒,每日2次,连续给药60d（以症状消失或明显减轻为停药标准）。给药前及给药第61天,各采静脉血5ml,分离血清。从血清提取蛋白,液-质联用技术检测蛋白,用ProteomeDiscoverer软件鉴定蛋白,SIEVE软件对血清蛋白进行相对定量定性分析,使用KOBAS数据库对差异蛋白进行进行GO注释和富集分析,使用 KEGGPATHWAY、Reactome、BioCyc、PANTHER、PID 数据库进行Pathway注释、富集分析,找出用药前后显著差异蛋白及参与富集通路。3.探讨苏—7对环磷酰胺（CTX）至卵巢损伤模型大鼠卵巢的功能保护及作用机制,采用96只正常性周期的大鼠随机区组法分6组,分别为模型组（CTX）、模型加戊酸雌二醇组（CTX+补佳乐）、模型加苏格木勒一7低剂量组（CTX+苏-7low）、模型加苏格木勒—7中剂量组（CTX+苏-7 mid）、模型加苏格木勒—7高剂量组（CTX+苏-7 high）、正常组（NC）,除了正常组其他5组均连续7天腹腔注射CTX30mg/kg.d。正常组和模型组等量生理盐水灌胃,其余给药组在造模第一天开始（建模同时）分别灌胃给予苏—7 高（2.0g/kg.d）、中（1.0g/kg.d）、低（0.5g/kg.d）戊酸雌二醇（0.1mg/kg.d）,每天给药一次,连续给药24-29天,观察苏-7对大鼠一般情况及卵巢功能的影响。所有大鼠均每日阴道细胞涂片分析,观察大鼠动情周期变化;于动情期以2:1比例与雄性大鼠进行交配,监测大鼠生殖能力;ELISA法检测血清激素水平变化及炎症相关因子;取一侧卵巢,在光镜下观察卵巢组织形态学变化及不同阶段卵泡的数量,比较大鼠卵巢储备;采用免疫组织化学法检测卵巢组织氧化应激相关蛋白8-0HdG、4-HNE、NTY及卵泡发育相关细胞因子BMP—15、GDF—9的定位及表达量;用Westernblot法检测卵巢组织凋亡相关蛋白及抗氧化相关蛋白Bax、BcI-2、SOD的表达量,以及验证前期临床实验病人血清蛋白组学检出的差异蛋白TSP-1、CathepinD、BST1、CFH等的表达量。结果1.苏—7治疗后对予卵巢早衰组月经情况及性激素水平有所改善,但均无显著性差异（P>0.05）;症状积分治疗后明显下降（P<0.05）;临床总疗效43.33%。对于40—50岁绝经前期组月经情况明显改善、雌激素水平明显升高（P<0.05）,能明显降低FSH（P<0.01）;能明显改善临床症状（P<0.01）;临床总疗效高（90%）。对于绝经后期组月经情况及性激素水平均无明显改善（P>0.05）,症状积分明显下降（P<0.01）,临床总疗效93.33%。2.蛋白组学研究结果,用药后的差异蛋白有15个。这些蛋白主要为免疫球蛋白、补体因子H、α-2-HS-糖蛋白、抗胰蛋白酶、组织蛋白酶-D、血小板反应蛋白、ADP核糖环化酶/环ADP核糖水解酶-2、基质金属蛋白酶-9等,G0分析它们参与免疫调节、提高机体免疫、补体激活、炎症反应、外界刺激反应等生物学过程;KEGG分析发现上述差异蛋白共涉及 Nicotinateand nicotinamidemetabolism、Salivarysecretion、Pancreaticsecretion、Metabolic pathways、Staphylococcus aureus infection、Complement andcoagulation cascades、RegulationofComplementcascade、Complementcascade、InnateImmune System、ImmuneSystem 等 10 条信号通路。3.动物实验及作用机制研究结果,苏-7低、中组可以改善CTX后大鼠卵巢功能。实验结束后,模型组大鼠体重、卵巢重量及脾脏重量明显下降（P<0.05）;C苏-7中组大鼠体重明显增加,苏-7低组卵巢及脾脏重量明显增加（P<0.05）。性激素水平:①随着鼠龄的增长,正常组的AMH会下降。②CTX同时苏-7治疗15-18天时,CTX组大鼠AMH水平显著下降（P<0.05）。苏-7中组与模型组比AMH显著增高（P<0.01）,与戊酸雌二醇组比AMH显著增高（P<0.05）。苏-7低组与模型组比AMH显著增高（P<0.05）,苏-7中组AMH水平最高;苏-7低组能显著增高E2水平。③CTX+苏-7治疗24-29天时,各组见比较AMH、E2、FSH均无显著差异（P>0.05）,这可能与此时模型的内分泌功能已经恢复,苏-7药效最佳时间已过有关。三种剂量苏-7组大鼠恢复性周期比率有显著差异（P<0.01）。CTX后各级卵泡数目均减少,其中窦状卵泡数与正常组比显著下降（p<0.05）,而闭锁卵泡显著增加（p<0.05）,苏-7高和低组大鼠窦卵泡数目和模型组相比显著增高（p<0.05）,三种剂量苏-7组大鼠闭锁卵泡数目与模型组相比显著减少（p<0.05）。卵巢组织形态学观察结果:CTX组卵巢略萎缩、各级卵泡数少、颗粒细胞层次减少、部分卵泡发育不良、囊性扩张的卵泡增多、其内卵母细胞消失、间质内纤维结缔组织增生及灶状淋巴细胞侵润;苏-7组大体上见各级卵泡及黄体、其中窦状卵泡相对增多或窦状卵泡增生为主,颗粒细胞层增多;补佳乐组各级卵泡数均少、窦状卵泡相对增多,间质内淋巴细胞侵润。苏-7对大鼠生育能力的影响结果:CTX组生育率及新生鼠的存活率明显下降（P<0.01）;三种剂量苏-7组生育率及新生鼠的存活率均明显升高（P<0.01）;其中苏-7中组作用最强,与苏-7高低组及补佳乐组比较P<0.01。对大鼠血清TNF-α、IL-6、TGF-β1 的影响:CTX组TNF-α、IL-6显著增高（P<0.05）,TGF-β1 显著下降;苏-7中低组的TNF-α、IL-6显著下降（P<0.05）,TGF-β1 显著增高（P<0.05）。Western blot检测大鼠卵巢Bax、BcI-2、SOD及验证TSP-1、CathepinD、BST1、CFH等蛋白表达量结果:CTX组大鼠卵巢内Bax表达显著增高、Bcl-2表达显著下降（P<0.05）;苏-7中低组显著降低Bax、显著升高Bcl-2（P<0.05）,其中苏-7低组效果最佳,CTX组卵巢组织中TPS-1、CFH蛋白的表达量明显增加,SOD明显下降（p<0.01）;苏-7中低组TPS-1、CFH明显下降,SOD明显升高（p<0.05）。免疫组化结果,各组间均无显著性差异。结论1.苏-7对卵巢早衰及绝经前期及绝经后期组有不同的临床疗效。苏-7对绝经前期及绝经后期患者疗效佳,能改善卵巢功能、延缓卵巢衰老、改善围绝经期症状。故以绝经前期患者为对象,进一步行作用机制研究2.苏-7通过烟酸-烟酰胺代谢通路、胰腺分泌通路、唾液分泌通路、调节先天免疫系统通路,免疫系统通路及补体级联调节通路等多条通路相关蛋白的表达,从而延缓卵巢衰老及改善卵巢功能。3.苏-7对化疗模型大鼠体重、卵巢及脾脏具有保护功能。提高免疫力、促进卵巢修复、促进卵泡发育成熟及排卵而恢复性周期、提高殖能力及提高新生鼠的生存能力。其中以中低剂量苏-7疗效佳,故以此剂量做进一步的机制研究。4.苏-7对卵巢内分泌和生殖功能的保护作用与其通过抑制TNF-α、IL-6、CFH水平增高,抑制机体炎症性损伤并保护机体器官功能;通过上调TGF-β1而促进颗粒细胞生长、增值及促进卵泡发育成熟、增加窦状卵泡数、并促进排卵、从而提高大鼠的妊娠率;一方面通过提高SOD表达而提高卵巢组织抗氧化能力、抵抗化疗至卵巢氧化应激状态而抑制卵巢颗粒细胞凋亡及卵泡闭锁,另一方面通过增加抗凋亡因子,降低促凋亡因子而防止过早凋亡而抵制卵泡闭锁、从而增加健康卵泡数目来保护化疗大鼠卵巢储备、改善卵巢功能;还有一面可能通过降低TSP-1而改善卵巢组织微循环、防止卵巢纤维化、提供卵泡发育的有利环境;还有一方面通过增加脾脏重量,脾组织淋巴细胞增多,免疫力提高等多方面、多途径来对化疗性卵巢功能低下大鼠内分泌和生殖功能起到保护作用。5.组学差异蛋白TPS-1在大鼠卵巢组织中得到验证,苏-7治疗后均显著降低趋势。6.中低剂量的苏-7防治化疗性卵巢功能低下作用优于补佳乐,而且低剂量苏-7疗效更佳。