【摘 要】
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pXZ10145是一种谷氨酸棒杆菌内源小质粒，以θ方式复制，是构建载体的合适质粒。使用pXZ10145和大肠杆菌质粒pUC19构建了一个穿梭载体pAK6。pAK6的大小为5684bp，带有卡那霉素和氨
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pXZ10145是一种谷氨酸棒杆菌内源小质粒，以θ方式复制，是构建载体的合适质粒。使用pXZ10145和大肠杆菌质粒pUC19构建了一个穿梭载体pAK6。pAK6的大小为5684bp，带有卡那霉素和氨苄青霉素抗性基因作为选择标记，还带有EcoR I，Kpn I Bg1 II，Hind III，Pst I，Xba I，Sph I单一切点的多克隆位点区。以质粒pXC99E为模板，用PCR获得氯霉素乙酰转移酶基因(CAT)的编码区，将其插入phK6的多克隆位点中；并在其上游插入谷氨酸棒杆菌LeuB基因的终止子，构建了一个穿梭型启动子探测载体pAKC6。pAKC6的大小为6474bp，以CAT作为报告基因可用来筛选启动子和测定启动子的强度。通过鸟枪法，从谷氨酸棒杆菌1.1047基因组中筛选到两个具有启动功能的片段。这两个片段的存在使菌体中氯霉素乙酰转移酶比活力分别提高了88倍和125倍。核酸序列分析结果表明，两个片段分别长494bp和632bp，。应用Neural Network Promoter PredictionV2.2启动子预测软件对片段进行分析，均发现了可能的启动子区域，从结构上肯定了启动功能片段的存在。
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