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齐墩果酸(oleanolic acid, OA)是一种植物来源的五环的萜类化合物。广泛分布于自然界药本植物的果实和叶片中。本论文首先通过MTT实验发现,OA对于人类胃癌细胞SGC-7901、MGC-803和BGC-823具有良好的抑制作用。由于之前的报道中,OA对其它癌细胞的抑制作用多通过诱发细胞凋亡。因此实验通过Annexin V-FITC/PI双染和caspase-3活性测定的方法检测OA是否在胃癌细胞中也引起了凋亡。结果证明,OA诱发的胃癌细胞死亡并不通过凋亡途径。凋亡抑制剂z-VAD不能抑制OA引起的胃癌细胞死亡进一步证实了这一点。实验中发现OA诱导了胃癌细胞SGC-7901、MGC-803和BGC823的自噬途径。我们首先检测到OA处理的胃癌细胞中,自噬起始蛋白Beclin-1和自噬体形成蛋白LC3-Ⅱ的表达大量增加。在转染GFP-RFP-LC3质粒的胃癌细胞中,相比空白组细胞, OA处理组可通过共聚焦显微镜检测到大量被GRF和RFP荧光标记的自噬体。进一步通过透射电镜的直接检测,也观察到加药组胃癌细胞中大量自噬体的形成。同时通过自噬抑制剂3-MA和Beclin-1 siRNA阻止OA引发的自噬作用,发现OA引起的细胞死亡也被抑制。因此得出结论,OA对胃癌细胞SGC-7901、MGC-803和BGC823的抑制是通过诱导其自噬性死亡。mTOR是细胞中调控自噬的重要因子,mTOR的磷酸化修饰受到抑制是自噬起始的标志。mTOR在自噬途径中受到PI3K/AKT,ERK/MAPK,AMPK途径的调控。我们在研究中发现OA处理的细胞中,PI3K/AKT,ERK/MAPK途径受到抑制,AMPK途径被激活,这些结果都导致了mTOR的磷酸化受到抑制,并导致自噬的产生。进一步的研究表明,OA也诱导了线粒体膜电位的崩解和ROS升高。而还原剂NAC能降低细胞ROS的水平但不能阻止线粒体膜电位崩解和细胞的自噬,暗示ROS升高可能只是由于线粒体膜电位崩解导致线粒体ROS外泄的结果。我们猜测膜电位的崩解可能与OA诱导的自噬性死亡相关,而线粒体孔道蛋白可能参与了这一过程。而后我们定位到了线粒体孔道蛋白CypD,因为在加入CypD的抑制剂CsA或利用siRNA沉默CypD后,不仅有效的抑制了线粒体膜电位的崩解,并且有效地阻止了OA诱导的细胞自噬和自噬性死亡。因此可认定CypD是OA作用的重要靶位点。本文首次揭示齐墩果酸在胃癌细胞中诱发了自噬性死亡,这条自噬途径是通过抑制PI3K/AKT、ERK/MAPK通路,激活AMPK通路并最终导致mTOR的去磷酸化实现的。而线粒体孔道蛋白CypD是OA一个重要靶位点,OA与CypD作用导致了线粒体膜电位的崩解并最终导致了胃癌细胞自噬性死亡的发生。这项研究为齐墩果酸用于胃癌的治疗提供了重要的理论基础。