信使RNA（mRNA）承载着从生物体内的原始基因型到最终细胞功能表达型的重任,起着传递遗传信息的关键性作用。其中,mRNA的特定位点突变能够直接作用于最终蛋白的结构与功能,造成了包括癌症在内的多种疾病。研究表明,与DNA突变分析相比,灵敏检测与癌症相关的mRNA突变,在早期癌症检测以及术后治愈监测方面上更具有临床诊断价值。然而,由于具有临床意义的mRNA突变含量非常低,且样本中通常存在大量的正常野生mRNA背景。因此,准确检测与癌症相关的mRNA突变需要一种高灵敏度尤其是高特异性的分析方法。恒温指数扩增技术（Isothermal Exponential Amplification Reaction,EXPAR）由于操作简便、时间短、高灵敏度和高特异性特点广泛用于核酸的定量检测。在本论文中,我们提出了 一种基于RNase H定点酶切机制的恒温指数扩增反应体系,无需任何反转录步骤,实现了 mRNA单碱基突变的高特异性检测。我们创新设计了一条嵌合若干2-氧-甲基核苷酸的单链DNA探针（cmDNA）,用于mRNA突变位点的特异性识别并引导RNase H只能在mRNA突变位点（mutRNA）处进行高选择性酶切。酶切后的mutRNA暴露出新的3’-OH末端,进而能够引发后续高效的EXPAR反应。同时,由于单碱基错配引起的热力学差异,正常的野生型mRNA（wtRNA）不能与该cmDNA探针杂交而无法被RNase H水解,不能引发后续的EXPAR反应。该方法可以高灵敏检测低至fM量级的mRNA突变,并且在大量正常野生mRNA的干扰下,可以高特异性识别出低至0.1%的突变mRNA。该分析方法为高特异性、高准确度地检测RNA单碱基突变提供了一种新策略。另一方面,EXPAR虽具有操作简便、时间短,高灵敏度和高特异性等众多优点,但也存在固有的缺陷,即非特异性扩增（背景干扰）和部分引物失效,制约了该方法的灵敏度和普适性。针对EXPAR的这两个缺陷,一方面,我们提出了利用双脱氧胞嘧啶基团取代普通磷酸基团修饰,达到提高模板末端封闭效率,削弱非特异性扩增的目的。另一方面,我们创新性提出采用2’-氧-甲基核苷酸嵌合的非对称模板代替普通对称EXPAR扩增模板,采用较高的反应温度,使引物更倾向于与扩增模板的3’端区域杂交,达到提高扩增效率和灵敏度的目的。在这项工作中,采用我们的不对称修饰模板策略,利用传统EXPAR设计扩增差异显著的mir-122,mir-125b,mir-24三种miRNAs进行验证,其检测灵敏度普遍提高了3～4个数量级,浓度低至aM级的目标分子也可以被轻松检测到。该策略抑制了 EXPAR非特异性扩增的同时有效改善了引物失效引起的扩增效率问题,同时也为其他恒温扩增技术的进一步优化提供了重要参考。