论文部分内容阅读
抑制素(inhibin)主要由卵巢的颗粒细胞产生,由α亚基分别与βA、βB亚基构成两种形式的inhibinA和inhibin B。长期以来的观点认为,Inhibin可通过垂体前叶与卵巢间的长反馈环抑制垂体前叶分泌FSH,从而调节卵泡的发育,inhibinA在其中发挥重要作用。但是InhibinA是否通过短反馈环在卵巢水平上调节FSH的功能,目前还不清楚。本实验以原代培养的DES处理的未成年大鼠颗粒细胞(GC)为模型,在无血清培养条件下加入FSH(20ng/ml)和/或inhibinA(80ng/ml)等处理24小时后收集细胞,探讨inhibinA对颗粒细胞FSHR表达的影响及对FSH作用的调节。用实时定量PCR方法检测FSHR mRNA水平的表达变化,结果发现,FSH可上调FSHR mRNA水平,用inhibinA处理GC,FSHR的表达较对照组略微下调,但当与FSH协同处理细胞后,inhibinA可显著抑制FSH诱导的FSHR的水平。我们选取了孕酮和雌二醇合成的关键酶:胆固醇副链剪切细胞色素P450(P450scc,CYP11A1)和P450芳香化酶(P450arom,CYP19a1)采用相同处理模式进行试验,实时定量PCR的结果与上述结果类似,这说明inhibinA可抑制FSH诱导的类固醇生成相关基因的表达。通过检测Forskolin对孕酮和雌二醇生成的影响,发现该抑制作用是发生在cAMP通路的上游。为了进一步研究inhibinA调节FSH及其受体的机制,我们研究了在此过程中雄激素受体(AR)等转录调节子的变化。Western Blot和免疫细胞化学试验与实时定量PCR结果一致:FSH可增加AR蛋白表达水平,加入inhibinA共处理后,其蛋白水平明显下降。总之,本实验的研究首次证明了:inhibinA可通过自分泌的方式减少颗粒细胞FSHR的表达,AR等转录调节子参与了该过程;inhibinA对FSH的反馈抑制作用发生在cAMP通路的上游,可抑制FSH诱导的内固醇生成相关基因P450scc和P450arom的表达。该研究对传统的观点:inhibin通过长反馈环负反馈抑制垂体释放的FSH的作用是重要的丰富和补充,并且为进一步研究inhibinA在调节卵巢功能中的作用提供了重要的理论基础。