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目的 肾细胞癌是泌尿系统中最常见的恶性肿瘤之一。由于内源性和外源性多药耐药机制的存在,肾细胞癌对化疗不敏感。寻找新的有效疗法一直是肾细胞癌治疗研究的首要问题。肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)是肿瘤坏死因子(TNF)超家族一员,近年的研究表明,TRAIL可在体内、体外诱导包括肾细胞癌在内的多种肿瘤细胞发生凋亡,而对正常细胞几无毒性。在目前已知的5种TRAIL受体(TRAIL-R)中,只有TRAIL-R1和-R2在细胞膜内侧含有可启动凋亡级联反应的死亡域,被称为死亡受体;而TRAIL-R3、R4以及游离受体OPG都没有凋亡诱导功能,因而被称为假受体。这些假受体的存在必将减弱TRAIL与死亡受体的结合效率,影响治疗效果。不仅如此,TRIAL-R4还被发现能诱导NF-κB和它所调控的凋亡抑制因子的表达,如Bcl-xL、Bcl-2等,从而部分地中和TRAIL的凋亡诱导作用。因此,去除假受体的干扰,而只特异性地激活死亡受体理论上应能发挥TRAIL通路的最大促凋亡效应。本项研究应用两种TRAIL-R死亡受体的单克隆抗体,对肾癌细胞进行了体内、体外的治疗性研究,为探索这一新的治疗途径,提供实验基础。 方法 采用Ficoll-Paque不连续梯度离心法分离原发肾细胞癌组织中的肾癌细胞,进行体外培养。应用MTT方法分析抗TRAIL-R1单克隆抗体(ETR1)和抗TRAIL-R2单克隆抗体(ETR2)以及人重组TRAIL对人肾癌细胞系ACHN、Caki-1以及原发肾癌细胞的细胞毒效应;应用流式细胞术检测TRAIL-R1和TRAIL-R2在这些细胞中的表达;应用Hoechst 33342荧光染色和Annexin V/碘化丙啶(PI)染色标记,荧光显微镜和流式细胞术