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背景和目的：血管壁由内膜、中膜和外膜构成，八十年代以前主要集中于对中膜肌层的研究，证实动脉粥样硬化和高血压与中膜肌层重构和反应性增高有关。早期认为内膜仅作为血流屏障而存在。但1979年Furchgott等首次报道血管内皮能产生血管舒张因子(NO)及Yangisawa等报道血管内皮也能产生很强的缩血管物质(内皮素)后，二十多年的工作表明血管内皮功能紊乱也与心血管发病关系密切。相对于中膜及内膜而言，至今对外膜功能的了解还较少。直到近年发现血管外膜并不仅仅起支持和营养血管的作用，它还参与多种心血管疾病发生时的病理生理过程。如自发性高血压大鼠血管外膜细胞数量及胶原含量增多致血管顺应性下降。血管成形术后外膜成纤维细胞增殖并向内膜下移行参与新生内膜形成。通过外膜途径行基因转染及给药在解除冠状动脉及脑血管痉挛、球囊损伤术后内膜增殖方面有明显效果。尽管上述研究初步揭示外膜在血管结构和功能调控中有重要作用，但具体机制还不十分清楚，如外膜中的哪些因素在血管结构和功能调控中起重要作用？在高血压和高血脂的病理情况下，血管外膜对血管重构和功能有什么影响？这些问题均值得深入研究。方法：为客观反映外膜在体内所具有的功能，并明确外膜与中膜、内膜间的相互作用关系，本课题从整体、器官、组织、细胞和分子生物学各层次加以研究。整体水平研究：健康新西兰白兔，采取锐性刮除联合胶原酶Ⅱ浸泡方法在体去除一侧兔颈动脉外膜，另一侧作假手术。术后分三组：对照组，高血脂组(2%胆固醇喂养)，高血压组(埋植微量注射泵恒量注入去甲肾上腺素)。术后1周及2周取材。作下述观测：1、动态测定血脂及血压变化；2、病理组织学检查及图象分析血管构型变化；3、免疫组织化学方法观察VSMC及巨噬细胞增殖情况；4、血管张力测试观察血管的舒缩反应性；5、原位杂交及RT-PCR观察NADPH Oxidase p22phox、MCP-1、Rho-A、Rho激酶 mRNA表达；细胞水平研究：新西兰白兔颈动脉VSMC培养。取培养的第2－5代VSMC与外膜组织联合培养，应用LPS刺激造成炎性反应，并观察下述指标：1、比色法测定培养液中NO2－及抗超氧阴离子自由基；2、3H-TdR和3H-Leu掺入法反映VSMC核酸和蛋白合成；2、Fura-2/AM比率荧光成像系统分析VSMC [Ca2+]i信号变化；3、Western blot半定量分析VSMC 血红素加氧酶－1(HO－1)蛋白表达。<WP=10>主要研究结果：一、整体水平研究结果1. 术后即刻取出外膜去除侧与行假手术的完整侧血管。台盼蓝染色及HE染色后光镜观察，电子染色后扫描及透射电镜观察外膜去除较彻底，内皮及中膜无形态学损伤。血管张力测试显示外膜去除后血管对KCl、NE 的反应较完整侧减弱(P<0.05)。外膜去除后血管对ACh的舒张反应则较完整侧增强(P<0.01)。2. 高血脂组术后1周及2周时的TC、TG、 LDL-C、 Apo-B水平均明显升高(P<0.01或P<0.05)。高血压组术后1周及2周时收缩压及舒张压均明显升高(P<0.01)。3. 术后1周及2周时各组外膜去除侧均有新生内膜形成，术后2周高血脂及高血压组外膜去除侧新生内膜面积／中膜面积较对照组明显增大(P<0.01)。各组外膜去除侧血管总面积较完整侧明显增大(P<0.01)，术后2周高血压组增大程度最明显。4. 术后2周各组外膜去除侧血管对NE 的收缩反应较完整侧增强(P<0.05)，尤其高血压组增强最明显(P<0.01)。术后2周高血脂组外膜去除侧血管对ACh 的舒张反应较完整侧减弱(P<0.01)。5. 术后1周及2周各组外膜去除侧增殖细胞核指数较完整侧增高(P<0.01)。术后2周高血脂组外膜去除侧增殖细胞核指数较对照组外膜去除侧明显增高(P<0.01)。6. 术后各组外膜去除侧新生内膜成分为VSMC，术后各组完整侧与外膜去除侧的巨噬细胞着色仅限于外膜。7. 术后1周及2周各组完整侧p22phox mRNA的阳性着色主要分布在内膜及外膜，而外膜去除侧内、中及外膜均有着色。p22phox mRNA表达在术后1周各组外膜去除侧较完整侧增高(P<0.05)，术后2周仅高血脂组外膜去除侧p22phox mRNA表达仍较完整侧增高(P<0.05)。术后2周各组外膜去除侧Rho激酶 mRNA表达较完整侧增高(P<0.05)，高血脂及高血压可使表达进一步上调(P<0. 01)。二、细胞水平研究结果1. LPS(1ug/ml)刺激使VSMC 3H－TdR掺入率增加(P<0.05)，LPS通过刺激外膜NO生成(P<0.05)而显著抑制VSMC 3H－TdR掺入率(P<0. 01)。2. VSMC与外膜复合培养时培养上清液中抗超氧阴离子增加(P<0.05)，在加入LPS刺激后增加更显著(P<0. 01)。3. LPS刺激后Bayk 8644及AngⅡ介导的［Ca2+］i显著增加(P<0. 01)，在此基础上加入外膜可显著抑制Bayk 8644介导的［Ca2+］i增加(P<0. 01)，而对AngⅡ介导的［Ca2+］i增加无作用。4. VSMC与外膜复合培养时VSMC HO－1的蛋白表达显著增高(P<0. 01)，LPS刺激后此种增高进一步加剧(P<0. 01)。<WP=11>结论：通过观察无外膜存在时正常状态下、高血脂与高血压等病理状态下的兔颈动脉结构及功能变化，本研究得出以下结论：1. 在体情况下通过机械刮除联合胶原酶Ⅱ浸泡去除兔颈动脉外膜方法可充分去除外膜而不伤及肌层和内膜。2. 外膜去除后VSMC增殖及新生内膜形成，同时血管总面积扩大，?