紫锥菊(Echinacea purpurea)菊科紫锥菊属植物,是迄今为止世界上发现的极少数具有免疫力增强和抗炎双重作用的植物药之一,具有广泛的治疗范围和稳定的疗效。近年来紫锥菊的免疫活性也逐渐被国内重视,且已经在我国大面积的引种栽培。以国产紫锥菊为原料的各种制剂已经上市,所以有必要对引种紫锥菊和其制剂的质量进行控制。现代药理研究表明,咖啡酸衍生物是紫锥菊中一类重要的活性成分,具有增强免疫、抗炎和抗氧化等药理作用,在该类植物药和保健食品中,咖啡酸衍生物是其质量控制的重要指标成分。因而对国产紫锥菊中咖啡酸衍生物的分离鉴定以及标准品的制备就非常的必要。因此本研究结合植物化学理论和现代化学分离技术,对安徽桐城紫锥菊地上部分进行系统的化学成分预试的基础上,对其中咖啡酸衍生物进行了定向追踪和分离,最终应用HPLC方法制备了咖啡酸衍生物标准品。研究的具体内容包括以下三个部分。(1)咖啡酸衍生物的追踪条件确定：该类化合物分子呈酸性,在溶液中易电离,分子极性大,在λ365nm下有荧光,确定TLC条件为以乙酸丁酯：甲酸：水=6：0.5：0.8；确定HPLC检测条件为Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6mmm250mm,5μm);柱温35℃；流速1.2ml/min;检测波长330nm；进样量10μl；流动相为乙腈(A)-0.3%磷酸溶液(B)梯度洗脱。利用TLC和HPLC跟踪发现咖啡酸衍生物主要集中在正丁醇相。(2)化学成分的分离和鉴定：采用液液萃取技术、薄层色谱和凝胶柱色谱半制备高效液相色谱等分离方法,从紫锥菊甲醇提取物的正丁醇相分离得到7个化合物,经MS.’H-NMR、13C-NMR等波谱学方法并结合理化性质确定为绿原酸(1),阿魏酸(2),咖啡酸(3),菊苣酸(4),Caffeoyl-feruloyl-(2R,3R)-(+)-tartaric,(5),尿嘧啶(6),胸腺嘧啶核苷(7)。以上化合物均为已知化合物。(3)标准品的制备：由于咖啡酸类衍生物极性较大,首先采用D101大孔吸附树脂快速的将咖啡酸衍生物洗脱下来,将极性较小的成份分开,达到了理想的预纯化的目的。然后调节PH3左右,使咖啡酸衍生物主要以分子形态存在于溶液中,减小极性,减少分离纯化的难度,用乙酸乙酯萃取,可以有效的将糖类等极性较大的物质去除。其次用RP-18硅胶柱对得到的样品进一步分离纯化,最后用HPLC制备,得到高纯度的菊苣酸、绿原酸、阿魏酸、咖啡酸和Caffeoyl-fe ruloyl-(2R,3R)-(+)-tartaric等对照品。该提取分离过程,操作简单,生产成本低廉,使用的有机溶剂污染和毒性较小,容易回收利用。制备的产品纯度高,可用于保健食品及中草药分析的标准品。本实验意义：通过对紫锥菊中咖啡酸衍生物系统的分离鉴定,明确了国产紫锥菊中该类成分的组成,为以后的质量控制和活性研究奠定了基础。初步探索了咖啡酸衍生物的提取分离的过程,为以后的工艺研究奠定了基础。