桂树叶黄酮提取分离、结构鉴定及抗氧化研究

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桂树的根、茎、叶、花均具有不同的药用价值和生理功能,桂树叶片中含有多种生物活性物质,其中黄酮含量较高。黄酮是一类具有抗氧化、消炎抗癌等作用的天然提取物,有很广阔的发展前景。目前对于桂树叶黄酮的研究尚且停留在提取工艺优化层面,深入研究未见报道。因此本文对桂树叶黄酮类物质的超声波辅助提取、分离纯化、结构鉴定及体外抗氧化活性进行了较为系统的研究。采用NaN02-Al(N03)3比色法,以芦丁为标准品对桂树叶黄酮含量进行测定。将芦丁标准品与桂树叶粗提液与各种显色剂混合后,于510nm处测定紫外可见吸光度。得到芦丁标准曲线为 y=0.13046x+0.1261,R2=0.99884。通过单因素实验及响应面Box-Benhnken法中心组合实验,优化各因素,得到提取桂树叶黄酮最优工艺条件:乙醇体积分数77%,提取温度55℃,提取时间36min,料液比1:27。在此条件下桂树叶黄酮平均提取率实际可达17.28%。用AB-8大孔吸附树脂对黄酮粗提液进行初步分离纯化,不同浓度的乙醇溶液梯度洗脱。合并相同组分洗脱液,旋蒸冻干后,用葡聚糖凝胶Sephadex-LH20对黄酮细分,最终得到两种黄酮。通过显色反应、IR、UV-Vis、ESI-MS、NMR等分析技术对桂树叶各黄酮纯化物进行深入研究,结果表明,桂树叶中含有芦丁、槲皮素等黄酮物质。体外抗氧化实验测定桂树叶总黄酮粗提液、AB-8大孔树脂30%及50%乙醇洗脱液对羟基自由基(·OH)、DPPH自由基的清除能力及总还原力活性。发现桂树叶黄酮的总还原力较Vc强,并且具有一定的羟自由基清除能力和DPPH自由基清除能力,其中对DPPH自由基清除率最高可达到90%。
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