论文部分内容阅读
背景:COPD的发病和进展与多种发病机制有关,涉及炎症反应、蛋白酶/抗蛋白酶失衡、氧化抗氧化失衡、免疫反应等多个方面,炎症反应是COPD发病机制中的关键环节,蛋白酶/抗蛋白酶失衡是引起气道损伤、肺组织破坏的主要因素,两者相互影响,相互促进,是COPD病情进展的重要原因。本课题组根据COPD的中医理论认识,结合历代医家的临床用药经验及现代医学研究,以前期微型癥瘕的理论研究为基础,提出了“毒损肺络”假说,并据此拟定了益气排毒通络方。COPD发病过程中,先天性或后天AAT减少是肺组织自身防护功能减弱的重要原因;香烟烟雾刺激下肺组织中NE增多,AAT减少,造成NE/AAT失衡,是肺组织损伤的主要机制;烟雾同时也刺激气道上皮细胞分泌TGF-β1增多,从而抑制上皮细胞再生,是影响气道修复的重要因素,同时TGF-β1可诱导NE分泌,加重NE/AAT失衡,加剧肺组织损伤进程。三者共同作用造成肺组织损伤,导致病情加重,这与“毒损肺络”病机演变过程具有一致性。在前期的研究中,我们发现该方具有抑制COPD大鼠炎症反应的作用,本研究对弹性蛋白酶/抗蛋白酶失衡这一 COPD病理环节进一步研究,探索益气排毒通络方对COPD大鼠NE/AAT蛋白酶失衡的影响,探究该方治疗COPD的作用机制,为中药多环节、多靶点的治疗作用提供实验依据。目的:以TGF-β1、NE、AAT、NE/AAT水平变化为切入点,探究益气排毒通络方治疗COPD大鼠作用机制,验证“毒损肺络”假说的合理性,并提供实验依据。方法:将60只Wistar雄性大鼠随机分为空白组、模型组、西药组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组,每组10只。模型组、西药组和中药各组均采用香烟烟雾暴露联合气道内注入LPS法制备COPD大鼠模型。空白组、模型组予以生理盐水灌胃,10mL/kg,日一次;西药组给予布地奈德雾化吸入,1mL/日,生理盐水灌胃,10mL/kg,日一次;中药中剂量组以17.89g/kg浓度予以益气排毒通络方灌胃,中药低剂量组和高剂量组分别予以中剂量组的1/2和2倍浓度的益气排毒通络方灌胃,均日一次。实验12周后行大鼠肺功能检测,取血及肺组织进行指标检测。结果:1.COPD大鼠模型建立:本实验以香烟烟雾暴露+气管内滴注LPS方式建立COPD大鼠模型,模型组大鼠一般状况（精神、身体状况等）较空白组变差,出现肺组织炎症细胞浸润、肺气肿,肺功能减低,血清中NE升高、AAT减低,NE/AAT升高,肺组织中TGF-β1mRNA及蛋白升高的COPD相关病理表现。2.一般状况及病理学结果:治疗组大鼠一般状况（精神、身体状况等）较模型组好;大鼠肺组织形态学观察发现治疗组大鼠肺气肿和气道、肺血管重构程度较模型组有所减轻。3.肺功能检测结果:与模型组相比,中药各组均可以改善COPD大鼠FVC、FEV0.2、FEV0.2/FVC、PEF、FEF25-75%、MMF 水平,均有统计学意义（P均<0.05）,并且具有中剂量组效果最好的趋势。4.蛋白酶及TGF-β1检测结果:ELISA结果显示,与模型组相比,中药组NE水平降低,AAT升高,NE/AAT降低,其中高剂量组效果最好（P均<0.05）;qPCR结果显示,与模型组相比,中药组肺组织内TGF-β1mRNA表达减少（P均<0.05）:Westernblot结果显示,与模型组相比,中药组TGF-β1蛋白表达降低（P均<0.05）。5.蛋白酶/抗蛋白酶失衡与TGF-β1相关性方面:大鼠血清中NE、NE/AAT水平与肺组织中TGF-β1mRNA及蛋白表达呈正相关,大鼠血清中AAT水平与TGF-β1mRNA及蛋白表达呈负相关。结论:益气排毒通络方可以直接调节NE、AAT、NE/AAT水平,也可通过干预TGF-β1mRNA的表达,减少TGF-β1蛋白水平,进而调节NE、AAT、NE/AAT水平,从降低肺组织损伤、加强肺组织保护两个方面减少肺组织弹性蛋白的分解,保护肺组织,改善肺功能、起到治疗COPD疾病的作用;同时也验证了“毒损肺络”病机假说的合理性。