论文部分内容阅读
双黄连是由金银花、黄芩、连翘组成的中药复方制剂,它们的主要成分为绿原酸、黄芩苷、连翘苷,主要用于外感风热引起的发热、咳嗽及多种上呼吸道感染等病症。本文通过体外和体内试验,分别探讨了双黄连各主要成分间相互作用的分子机理及其对肝脏的保护作用。体外试验:通过胶原酶两步灌流法获取大鼠原代肝细胞,用不同浓度的双黄连及其主要成分绿原酸、黄芩苷、连翘苷处理24h～72h,Western Blot法检测肝细胞中CYP3A1的表达。结果显示:每只大鼠可获得(2～4)×10~8个肝细胞,成活率在95%左右,培养的肝细胞形态完整、生长良好,可用于药物代谢的研究。绿原酸在24h内对肝细胞CYP3A1无诱导作用,但处理48h、72h后CYP3A1的表达随药物浓度的增加而呈上升趋势。连翘苷作用24h～72h后,肝细胞CYP3A1的表达随药物浓度的增加呈递增的趋势,作用时间越长,表达越明显;10μM连翘苷作用72h对肝细胞CYP3A1的诱导作用最强。黄芩苷作用24h～72h后,肝细胞CYP3A1的表达随药物浓度的增加呈递增的趋势,10μM黄芩苷对肝细胞CYP3A1的诱导作用最强。绿原酸、黄芩苷、连翘苷两两配伍后处理肝细胞24h～48h,CYP3A1的表达与药物的浓度和作用时间呈正相关。双黄连处理肝细胞24h～48h后,CYP3A1的表达随药物浓度的增加呈上升趋势,相同浓度梯度下,48h比24h明显,且100μM的双黄连对CYP3A1的诱导作用最强。体内试验:将50只SD大鼠随机分成5组(每组10只):空白对照组(给予生理盐水)和双黄连处理组(剂量分别为100mg/kg、200mg/kg、500mg/kg、1000mg/kg),每天腹腔注射一次,连用7天,处死大鼠,检测血清中ALT、AST、LDH、GSH及肝组织匀浆中MDA、SOD的含量,HE染色观察肝组织病理形态学的改变。结果显示:各组大鼠的ALT、AST、GSH、LDH、MDA、SOD的活力及肝病理形态学观察均正常。另取40只SD大鼠随机分成4组(每组10只):对照组和对乙酰氨基酚(APAP)模型组给予生理盐水,阳性药物组给予甘利欣,双黄连处理组给予200mg/kg双黄连,每天腹腔注射一次,连续7天,末次给药8h后,除空白对照组外其余各组均腹腔注射300mg/kgAPAP,对照组给予等体积生理盐水,禁食不禁水,16h后处死动物,检测血清中ALT、AST、TP的含量,HE染色观察肝组织病理形态学的变化。结果显示:与模型组相比,双黄连处理组大鼠血清中ALT、AST水平显著降低,TP的含量显著升高(P＜0.01)。模型组大鼠肝脏颜色变浅,表面略显粗糙,质脆,肉眼可见细小颗粒,肝小叶正常结构破坏,肝索解离,排列紊乱,脂肪变性较重,炎性细胞浸润明显,有充血现象。双黄连处理组与模型组相比,肝组织病理性改变较模型组明显减轻,脂肪变性减少,偶见充血,少见炎性细胞浸润。以上结果表明:双黄连及其有效成分绿原酸、黄芩苷、连翘苷均对大鼠肝细胞CYP3A1具有诱导作用。绿原酸、黄芩苷、连翘苷两两配伍后,对大鼠肝细胞CYP3A1诱导作用增强。双黄连对肝脏的毒性小,并能明显减轻APAP所致急性大鼠肝损伤,对肝损伤具有一定的保护作用。