威灵仙来源于毛茛科威灵仙Clematis chinensis Osbeck、棉团铁线莲Clematis hexapctala Pall、东北铁线莲Clematis manshurica Rupr的干燥根及根茎。目前《中国药典》采用横切面显微鉴别和水解后的齐墩果酸含量测定对其进行质控。由于威灵仙药效成分尚未明确,现有标准对威灵仙的内在质量控制仍存在一定的问题,需要进一步研究改进。本论文针对威灵仙现有质量标准中存在的科学与技术问题开展威灵仙的指纹图谱研究,以期为威灵仙质量标准的改进提供研究依据。主要内容与结论如下:1.威灵仙的基原鉴别研究。通过对市场采购的13批威灵仙药材分别采用横切面和粉末制片,考察并优化制片方法,观察比较不同批次药材的显微特征。结果发现横切面的外皮层细胞排布显微特征显著,粉末的木纤维、韧皮纤维、石细胞显微特征显著。结合药典标准,可根据横切面的外皮层细胞延长方向鉴别威灵仙;根据粉末的石细胞和韧皮纤维特征鉴别棉团铁线莲和东北铁线莲。采购的13批威灵仙药材中2批为威灵仙,2批为棉团铁线莲,9批为东北铁线莲。因此,粉末显微可有效弥补横切面显微鉴别的不足,将粉末与横切面显微相结合,可快速高效地鉴别中药材威灵仙的三种基原,对药典现有显微鉴别方法是一个有力的补充。2.威灵仙的提取方法研究。通过对比加热回流与超声对威灵仙提取的影响,发现两种方法所得的提取物HPLC图谱总体组成相近,加热回流较超声提取的谱峰峰值普遍偏大且多出一个谱峰。经纯化制备采用NMR鉴定结构,并结合对照品HPLC分析后,该谱峰确证为5-羟甲基糠醛。根据文献研究,该物质常见为中药的糖类成分加热降解产物。鉴于超声提取方法具有效率高、时间短、温度低、简单易行的特点,因此确定威灵仙提取方法为水超声提取。3.威灵仙的HPLC指纹图谱研究。优化建立了威灵仙水提物的HPLC分析方法:流动相为乙腈-0.5%醋酸水溶液（V/V=5.5∶94.5）;梯度洗脱为（0⁵ min,5%B;5²5 min,5%B¹8%B;30⁴5 min,18%B²7%B）;流速为1.0 mL·min^-1;进样量为20μL;检测波长为280 nm。经单因素和正交设计考察后得到最优超声提取工艺为:药物粒径80-100目;料液比1∶12;提取时间30 min;提取次数3次。基于13批威灵仙的HPLC图谱建立对照指纹图谱,标示16个指纹峰,并进行了相似度评价。不同产地、基原威灵仙的水提物组成大致相似,但成分数目及其含量存在一定的差异。有7个批次药材的相似度大于0.9,其余批次的相似度介于0.63-0.80之间。相似度与基原、产地等因素未呈现出相关性。其中,购自药店的5批药材相似度均大于0.9,表明药店来源的药材质量相对可控。威灵仙药材的指纹图谱质量控制方法具有一定的可行性,但有待增加可信样品后进一步深入开展研究。