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目的: 观察通里攻下的经典方剂大承气汤对重症急性胰腺炎(severe acutepancreatitis,SAP)患者血清高迁移率族蛋白B1(high mobility group box1,HMGB1)的影响,并通过复制SAP小鼠模型,从对HMGB1调节的角度探讨大承气汤治疗SAP的分子机制。 方法: 1.临床研究:临床收集SAP患者60名,分为2组:SAP组(常规治疗)和大承气汤组(常规治疗联合大承气汤应用),每组30例。另随机抽取健康志愿者30例作为空白对照。比较入组者的一般资料。对SAP组和大承气汤组患者的腹部严重度进行评分,比较并分析2组患者血清淀粉酶、白细胞和C反应蛋白的水平。观察并比较患者临床指标(腹痛、腹胀缓解时间;排气排便、进食恢复时间);血清指标(白细胞、C反应蛋白恢复正常时间)和经济指标(住院天数,住院费用)等,评估大承气汤临床应用对SAP患者的治疗效果及医疗资源的节约效果;通过比较入组第1天血清HMGB1和炎性因子白介素(Interleukin,IL)18的含量,分析HMGB1在SAP中的表达;通过分析SAP组和大承气汤组血清HMGB1和IL-18的含量,分析大承气汤对SAP患者HMGB1及炎性因子IL-18的影响。 2.体内研究:雄性C57BL/6小鼠30只,随机分为5组:对照组、SAP组(雨蛙素联合脂多糖腹腔注射)和大承气汤低中高剂量组(3 g/kg、9g/kg和27 g/kg灌胃)。第1次雨蛙素注射后24h处死小鼠,摘眼球取血,留取胰腺组织。测定血清淀粉酶、HMGB1、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、IL-1β、IL-6、IL-18、脂肪酶和乳酸脱氢酶的含量;检测胰腺组织胰蛋白酶活性和髓过氧化物酶的含量;对胰腺组织进行HE染色观察病理学变化,并进行严重度评分;免疫荧光检测胰腺组织HMGB1的定位;免疫组化及Western blot检测HMGB1的表达、HMGB1受体Toll样受体(Toll-like Receptor,TLR)4和9,以及NOD样受体蛋白3(NOD-like receptor protein3,NLRP3)炎性小体通路关键蛋白表达; western blot检测HMGB1相关核转录因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)和丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated Protein Kinase,MAPK)信号通路关键蛋白的表达。 结果: 1.临床研究:三组入组者的一般资料(性别构成和年龄)组间比较均无差异;SAP组与大承气汤组患者在入组时血清淀粉酶水平、白细胞、C反应蛋白和腹部严重度评分方面均无明显差异;应用大承气汤治疗后,SAP患者腹胀缓解时间、排气排便、进食恢复时间、血白细胞恢复正常时间,住院天数和住院花费均显著下降,差异具有显著性(P<0.05);大承气汤组腹痛缓解时间及CRP恢复正常时间较SAP组有所下降,但未达到统计学差异;与对照组相比,SAP患者血清HMGB1、IL-18水平在入组第1天即显著升高;与SAP组比较,大承气汤组患者血清HMGB1和IL-18水平从入组第3天开始即显著降低(P<0.05)。 2.体内研究:SAP小鼠血清淀粉酶、HMGB1、TNF-α、IL-1B、IL-6、IL-18、脂肪酶、乳酸脱氢酶和髓过氧化物酶的含量,及胰腺组织胰蛋白酶活性均较对照组显著升高(P<0.05);大承气汤治疗可以剂量依赖性降低上述指标,其中中剂量组和高剂量组与SAP组相比,差异有统计学意义;HE结果显示SAP组小鼠胰腺组织出现水肿、出血和炎性坏死,大承气汤可以减轻上述损伤,保护胰腺组织;应用大承气汤治疗可以抑制SAP小鼠胰腺组织HMGB1的释放以及其从细胞核到胞浆的转位;大承气汤可降低HMGB1受体TLR4和TLR9的表达;抑制HMGB1/TLRs下游NF-κB和p38 MAPK通路的激活;此外还能通过影响NLRP3炎性小体的关键蛋白——凋亡相关的斑点样蛋白ASC和Caspase-1的表达,影响NLRP3炎性小体的活化,抑制促炎症细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β和IL-18的表达,减轻炎症反应。 结论: 1.大承气汤可以有效缩短SAP患者腹胀时间,缩短排气、排便、进食恢复时间和血白细胞恢复正常时间,并且可以缩短住院天数和花费,对SAP临床疗效确切。但对腹痛缓解时间及C反应蛋白恢复正常时间无明显效果;SAP患者入组当天血清HMGB1水平即明显升高,且一直持续到1周后,大承气汤可以显著抑制血清HMGB1的升高,其临床疗效的可能机制之一是对HMGB1的调控。 2.SAP小鼠胰腺功能受损,血清HMGB1升高,大承气汤可以剂量依赖性抑制小鼠HMGB1的表达,其机制包括调控HMGB1从胞核向胞浆的释放、降低HMGB1与TLR受体的应答、抑制HMGB1相关的NF-κB、p38 MAPK通路和NLRP3炎性小体的活化等,从而改善SAP小鼠胰腺功能,抑制炎性因子的生成,减轻SAP。