手足口病(Hand-foot-mouth disease, HFMD)是由多种肠道病毒引起的常见传染病,以婴幼儿发病为主。其中以EV71及CoxA16型最为常见。近几年来发病率有增加趋势,从2008年3月份开始在我国安徽省阜阳市流行的手足口病的病原体,经中国疾病预防控制中心实验室检查,结果确认是由肠道病毒71型(EV-71)所引起的。截至2008年5月7日,我国感染手足口病人数已经达到16,778人,死亡28人。鉴于手足口病缺乏有效的实验室检测诊断,临床表现渐趋不典型,极易出现漏诊、误诊,延误治疗,并发无菌性脑膜炎、脑炎、急性弛缓性麻痹、呼吸道感染和心肌炎等,个别重症患儿病情进展快,易发生死亡。尤其不典型病例的早期诊断,存在很大困难。为了解济南地区的手足口病肠道病毒71型分子分型,研究更有效的实验室检测诊断指标,故对手足口病肠道病毒71型分子分型和实验室诊断特点的进行研究,以满足临床诊断需要,降低患儿的致残率和死亡率。本课题旨在通过我院住院的手足口病患儿的粪便和脑脊液提取病毒RNA的方法,应用逆转录聚合酶链反应及聚合酶链反应技术检测病毒,并对其进行VPl片段分析,研究其基因分型和分子进化,并对实验室诊断特点进行研究。目前已取得如下结果：1、采用卫生部推荐的引物序列,用北京天根RT-PCR试剂盒进行扩增,可得到清晰的无杂带的目的条带。用于暴发期的筛检是可行的。2、我室检测的9个样本(分别来自济南、郓城、平阴、河北清河、梁山、夏津、高唐、临清、乐陵)在核苷酸2366-2592区域,其同源性高达98.7-99.1%,仅有一个患者发生核苷酸的缺失。3、手足口病人并发与非并发脑炎的核苷酸在2366-2592区域无任何不同(VP3-VP1部分区域)4、用卫生部推荐的EV71引物与我们自行设计的P2、P4引物的测序结果是一致的,证实济南地区流行的EV71病毒株与阜阳地区的病毒株是同源的,但本研究中新设计的两对引物扩增的片段分别为618bp和569bp,远远长于卫生部推荐的引物扩增的226bp的长度,对于研究病毒的分子分型和诊断具有明显的优势。5、所测病人的EV71,均与安徽阜阳株在同一进化树上,分子分型为C4亚型。6、手足口病患儿实验室检测发现,多数表现为总T细胞减低,CD4细胞明显减低,重症病例、脑炎、脑膜炎和脑干脑炎病人CD4的降低更明显。本课题研究表明：在疾病早期从患儿的粪便和脑脊液提取RNA进行RT-PCR检测的方法,对儿童手足口病患儿肠道病毒71型的病原学检测其灵敏度高,特异性强,有较高的临床应用价值。推广后,有助于手足口病早期诊断、减少误诊、降低病死率和致残率,提高患儿生存质量,提高人口素质,降低医药费用,减轻病员经济负担。在手足口病的病原学检测同时,观察其病原流行分布情况,并为预防控制疾病发生发展提供依据,可起到很重要的作用,因而具有良好的社会效益和深远的社会意义。本研究经山东省医药卫生科技信息研究所检索中心联机检索,国内外有涉及EV71病毒缺失或变异文献的报道,但未见有C4亚型2759位A缺失和核苷酸在2530、2659、2695、2884、2983、2994、3040、3073、3103、3133、3182等13个位点变异的研究报道；有手足口病并发脑干脑炎、肺水肿患者CD4+T淋巴细胞下降的文献报道,但未见有并发脑炎、脑膜炎患者CD4淋巴细胞检测的文献报道；也未见有手足口病并发重症脑炎患者与非脑炎手足口病患者核苷酸序列无差异性的报道。