目的宫颈癌是所有癌症中目前唯一明确病因的癌症,其主要原因为高危型HPV的持续感染。据报道,女性罹患宫颈癌呈逐年上升趋势,宫颈癌已经成为威胁女性健康的重要疾患,由此造成的生活质量的降低以及死亡已经引起世界卫生组织的关注。因此,宫颈癌的早期诊断以及预防显得越来越重要。在一些发达国家,宫颈癌的早期筛查已经普及。其原因归功于巴氏涂片的广泛应用,从而极大地推动了宫颈癌筛查项目的进展,然而该项技术本身存在局限性,影向了临床诊断效果,如所取的细胞量不稳定,诊断结果受取材的影响而不能重复等。近年来随着液基细胞学的临床应用使细胞量不足的问题得到了改善,然而其与巴氏涂片一样要依赖细胞病理学医生的主观判断,而细胞病理学医生的诊断水准不尽一致,从而降低了细胞学诊断的敏感性。并且,由于细胞学形态异常改变发生比较晚,不能早期预示病变情况,制约了其早期诊断意义。基于以上种种因素,HPV的检测就成为了宫颈癌早期筛查的切入点,这也被国内外同行所认可。随着HPV HC2方法的普及,其高的检测敏感性以及检测的稳定性使之成为美国FDA认证的HPV DNA检测的金标准,其对宫颈癌的筛查起到了不可替代的作用。然而,随着研究的深入,其问题也逐渐显现。有很多报道显示,其检测的特异性较低,容易引起假阳性,其结果往往会给临床医生进一步治疗带来困惑,相当一部分医师会采取过度的治疗方式,这样会给病人的身体和心理带来许多的伤害。特异性不高的根本原因在于HPV感染普遍性,以及HPV感染后有一过性消除的特点,HC2检测阳性结果只能证明曾经有过HPV的感染,目前体内是否已经清除病毒,是否持续感染,这些并不能得到证实。即使病毒依然存在于体内,其是否整合入宿主基因中,是否会导致上皮内病变,是否有活性的复制与转录,都无法从HC2的实验结果中判读出来,因而HC2方法也存在局限性。在这样的前提下,HPV E6/E7mRNA检测是否能够成为一个新的生物标记,其所检测的E6/E7mRNA是否可以反映当前体内病毒的活性情况,从而对临床起到更大指导意义成为一个值得探讨的问题。本研究的目的是与美国FDA (food and drug administration)认证方法HC2进行比对,以组织学检测作为金标准,从敏感性和特异性等方面评价HPV E6/E7mRNA对宫颈癌的诊断价值。对象与方法1研究对象标本来源于河南省妇幼保健院2011年1月到2011年12月间进行宫颈液基细胞学检查的标本272例,其中未见上皮内病变或恶性病变(NILM)28例、未明确意义的非典型性鳞状上皮细胞(ASC-US)140例、低度鳞状上皮内病变(LSIL)41例、高度鳞状上皮内病变(HSIL)47例、鳞状细胞癌(SCC)1例和非典型性腺上皮细胞(AGC)15例。HPV E6/E7mRNA检测标本来源于TCT检测后剩余液基细胞学标本。所有参与者均在了解详细研究细节后,自愿前提下签订知情同意书。2检测方法2.1杂交捕获法检测HPV DNA采用Digene公司专用的HPV采样刷置于宫颈口,逆时针转三圈,停留约10秒；将小刷子放于专用的标本储存管反复涮洗,折断多余部分、刷头留置试管内,盖好盖子。将标本送入实验室,经过裂解、杂交、捕获、抗原抗体反应和信号放大五个步骤,最后置于黑暗处,在DML2000内判读放大信号。2.2HPV定量检测试剂盒检测HPV E6/E7mRNA采用DiaCarta公司生产的QUANTIVIRUS(?)HPV E6/E7RNA3.0Assay (bDNA)检测试剂盒,检测液基细胞学剩余标本中的HPV E6/E7mRNA。经过漂洗、裂解、配置、布板、信号放大、读板、结果判定等步骤,得出HPV E6/E7mRNA检测结果。2.3细胞病理学诊断采用Digene公司提供的细胞采样器采集宫颈上皮脱落细胞,采集样本后的毛刷放入Digene公司细胞保存液中,将毛刷上的细胞尽量洗涤下来,然后用ThinPrep?2000自动制片机制片,制好后的涂片经95%酒精固定,巴氏染色后,中性树胶封片,干燥,由三位高年资的细胞病理学医师在光学显微镜下盲法阅片,诊断标准依照2001版TBS分级系统。2.4组织病理学诊断阴道镜检查发现异常者要进一步镜下取活检行组织病理学确诊,组织学活检诊断结果由一个或多个专业的组织病理学家出具,所有的诊断都遵照世界卫生组织(WHO)分类标准执行,在病理学家诊断过程中,HPV结果是不提供的。3数据统计所有数据分析均采用SPSS17.0数据包进行处理。χ2被用来比较两组标本差异的显著性,α=0.05为检验水准。ROC曲线被用来评估杂交捕获(HC2)和E6/E7mRNA两种检测方法对疾病诊断的准确性。结果1细胞病理学、组织病理学、HPV E6/E7mRNA检测结果272例标本中200例HPV E6/E7mRNA结果为阳性,占73.5%(200/272)。111例病理组织活检的病人中,94例HPV E6/E7mRNA阳性,84.9%(94/111)。2HPV E6/E7mRNA和HC2检测的一致性146例标本同时进行HPV E6/E7mRNA和HC2检测。两种检测方法的一致性是74.7%(109/146),95%的置信区间(CI)是(67.6,81.8)。3HPV E6/E7mRNA和HC2对CIN2+诊断的相关性75例标本同时检测细胞病理学、组织病理学、HPV E6/E7mRNA和HC2, CIN2+17例占22.7%(17/75),HPV E6/E7mRNA和HC2对CIN2+的敏感性均为82.4%(14/17),95%的置信区间为(64.3,100)。HPV E6/E7mRNA的特异性为15.5%(9/58),95%的置信区间为(6.2,24.8)；HC2诊断的特异性为29.3%(17/58),95%的置信区间为(17.6,41.0),两者比较P>0.05,无显著性差异。4ROC曲线HPV E6/E7mRNA比HC2方法的曲线下面积大,分别为0.638和0.563。当约登指数取最大值时,HPV E6/E7mRNA诊断的敏感性为58.8%,特异性为74.1%; HPV HC2诊断的敏感性和特异性分别为47.1%和70.7%。结论1HPV E6/E7mRNA诊断CIN2+敏感性与HC2均为82.4%,特异性与HC2相比无显著性差异。2HPV E6/E7mRNA可以作为宫颈癌的初筛工具。3HPV E6/E7mRNA协同HPV DNA检测对CIN2+诊断效果更佳。