同步检测HBV,HCV及HIV-1的DNA芯片研究

来源 :中国科学院研究生院(武汉病毒研究所) 中国科学院武汉病毒研究所 | 被引量 : 2次 | 上传用户:programmelove
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乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virgs,HBV),丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)以及爱滋病病毒1型(Human Immunodeficiency Virus type 1,HIV-1)是三种重要的人类病毒,主要以输血作为传播途径。由于导致的疾病很难治愈,因此对血制品或在输血前进行检测非常重要。传统免疫检测方法难以检测潜伏期以及抗原表位发生突变的患者且灵敏度较低;PCR方法每次只能检测一种病毒,费时费力。采用DNA芯片的方法可以快速,准确的同步检测这三种病原性病毒。 本实验的目的:1.建立病毒的DNA芯片检测的技术平台。2.建立阳性血清样品的DNA芯片检测的方法。3.将该方法应用于小规模的临床样品检测。 围绕实验目的我们做了如下工作以及取得如下结果: 在实验室已有的基础上,在玻片表面采用合适的修饰方法,以含有HBV、HCV、HSV-1、HCMV、HIV-1和EBV特异DNA片段的质粒为模板,完成了在片六重PCR。 采用已建立的芯片制备方法,在该六种质粒中选择含有HBV与HSV1两种病毒DNA序列的质粒为模板,进行同相两重PCR,采用芯片酶学枪测对固相两重PCR的扩增结果进行检测,得到良好的芯片酶学检测结果。 选择合适的核酸抽提方法,一步法抽提HBV、HCV及HIV-1的病毒核酸并一步法逆转录病毒的RNA,获得病毒的DNA。采用单重巢式PCR对结果进行检测,表明采用的一步法核酸抽提和逆转录的方法适用于该DNA芯片检测系统。 设计三重巢式引物,采用均匀设计,优化并建立了三重巢式PGR的反应体系。对阳性血清样品中获得的模板,在玻片上运用固相巢式三重PCR和芯片酶学检测方法检测HBV、HCV和HIV-1,获得良好的芯片酶学检测结果。 综上所述,我们建立了病毒的DNA芯片检测的技术平台以及将该项技术成功地应用到了HBV,HCV及HIV-1的阳性样品的检测中并初步开展了小规模的阳性血清检测。
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