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黄曲霉是一种腐生的土壤真菌,能够污染收获前和收获后的作物。同时,它也是一种机会病原菌,能够侵染人和动物引发曲霉病。黄曲霉毒素是一种次级代谢产物,主要是由黄曲霉和寄生曲霉产生的,具有非常强的毒性以及致癌性。黄曲霉功能基因的研究有助于为防控提供新的靶点和指导思想。本研究以参与粗糙脉孢菌RNA干扰途径的DCL1和DCL2蛋白为参照,通过序列比对检索到黄曲霉中相应的蛋白质序列。利用同源重组技术构建dcl1和dcl2单敲除突变株和dcl1/dcl2双敲突变株(即△dcl1、△dcl2和△dcl1△dcl2)。通过对野生型(WT)、△dcl7、△dcl2和△dcl1△dcl2突变株进行生长、产孢、产菌核、产毒和侵染玉米情况进行分析比较,发现:在生长方面,△dcl1△dcl2突变株生长速率与野生型基本一致,△dcl1和△dcl2突变株的生长受到了抑制,第4天时,△dcl1突变型的平均直径为野生型的94.17%,△dcl2突变型的平均直径为野生型的94.63%。在产孢方面,三种突变菌株与野生型相比没有显著差异。相反,产菌核对比结果显示,与WT相比,所有单基因突变菌株的产菌核能力显著提升。△dcl1产菌核能力增加了 31.91%,△dcl2产菌核能力增加了 46.13%。在YES液体培养基中的产毒情况分析结果显示,只有dcl基因双敲后黄曲霉毒素的产毒量才会明显下调,平均产毒量仅为野生型的68.33%。这说明dcl1和dcl2基因对产毒的作用可能是冗余的。玉米侵染的实验中,Δdcl1和Δdcl1Δdcl2突变株在侵染玉米的过程中,产孢量明显减少,其中Δdcl1的孢子数仅为WT的60.44%,△dcl1△dcl2的孢子数仅为WT的65.47%;花生侵染实验的结果与玉米基本一致。由此可以知dcl1基因是侵染过程中的关键基因。此外,本研究还对野生型和突变株在不同环境协迫条件下的生长情况进行了研究,结果发现dcl1和dcl2基因对细胞壁胁迫无明显响应,但对渗透压、氧化压有一定的响应。例如,在山梨醇的高渗胁迫下,△dcl1生长的平均抑制率比野生型增加了 7.37%,而△dcl2无显著差异。在8mmol/LH2O2条件下,与野生型菌株相比,△dcl2突变株生长的平均抑制率减少了 11.25%。综上所述,本研究初步弄清了 dcl1和dcl2基因在黄曲霉生长、产孢、产菌核、产毒、致病和适应环境刺激方面所起的作用,为今后粮食作物的储藏和黄曲霉的防治提供了理论基础。