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百合(Lilium spp.)是单子叶植物亚纲百合科(Liliaceae)百合属(Lilium)多年生球根花卉,是世界上重要的鲜切花之一。各系列品种百合中尤以东方百合系列茎杆硬度大,花杆挺直,花大而美丽,且开放时香气宜人,最适宜做为鲜切花生产和观赏而备受消费者的青睐,具有极高观赏性和经济价值。但是东方百合系列喜湿润微酸性土壤,对栽培养护要求较高,不耐寒,冬季需在保护地栽培,生产成本高。因此,在中国北方地区,东方百合做为切花大面积生产以及绿化应用时受到土地盐渍化、季节性干旱和低温等逆境条件的制约,限制了其在北方地区的广泛应用。因此,急需培育抗逆性强的东方百合系列品种丰富北方地区的园林绿化材料。由于利用传统育种和分子标记辅助育种技术培育抗逆性强的东方百合周期长、可利用基因资源有限,利用基因工程技术单独导入某个功能基因也难以获得理想的抗逆性。所以,近年来研究者将目光放在DREB转录因子上,在植物受到干旱、低温和高盐等逆境胁迫时,DREB转录因子表达量增加,并作用于一系列与抗逆性相关基因的DRE(dehydration responsive element)区域,调控这些具有抗逆功能基因的表达,从而提高植物抗逆性。因此,本研究以东方百合西伯利亚(Lilium cv.‘Siberia’)品种为试材,利用农杆菌介导法将E12强组成型启动子和rd29A诱导型启动子调控的DREB基因导入东方百合,建立了东方百合‘Siberia’高频再生系统和遗传转化系统,经PCR检测和PCR-Southern杂交检测得到了阳性植株。为培育东方百合抗逆性新品种奠定了基础,并为进一步揭示DREB基因抗逆境胁迫的分子机理提供理论依据。研究结果如下:1.东方百合‘Siberia’直接分化再生体系的建立:以东方百合‘Siberia’鳞片为起始外植体,获得无菌苗。鳞片不定芽芽分化培养基:MS+NAA1.0mg/L+ 6-BA0.5mg/L;无菌苗小叶片不定芽分化培养基:MS+NAA 1.0mg/L+6-BA 0.5mg/L+KT 0.1mg/L;不定芽增殖培养基为MS+60g/L Suc;生根培养基选用MS。移栽基质为土壤:蛭石=1︰1。2.东方百合‘Siberia’愈伤组织再生体系建立:无菌苗叶片愈伤组织诱导培养基:MS+NAA0.1mg/L+6-BA 1.0mg/L+2,4-D0.1mg/L;Picloram诱导叶片产生愈伤组织的适宜浓度为2.0mg/L。3.直接分化遗传转化体系最佳研究组合是:预培养3d+侵染菌液OD600值0.6+AS 20mg/L+侵染15 min+共培养4d+NH4NO310.3 mmol/L+Cef 350mg/L+30mg/LKm延迟12d筛选+110mg/LKm生根筛选。4.愈伤组织遗传转化体系最佳研究组合是:预培养3d+侵染菌液OD600值0.6+AS 60mg/L+侵染15 min+共培养6d+NH4NO310.3 mmol/L+Cef 200mg/L+110mg/LKm生根筛选。5.获得了农杆菌介导法转化pBc29A、pBcE12的东方百合‘Siberia’抗性植株21株和19株,抗性率分别为10.3%和9.7%。检测转化pBc29A的抗性植株21株,其中11株为PCR阳性植株,PCR阳性率为52.4%;检测转化pBcE12的抗性植株19株,其中11株为PCR阳性植株,PCR阳性率为57.9%;对11株转化pBcE12 PCR阳性植株进行PCR-Southern印记杂交检测,均为阳性植株;对11株转化pBc29A PCR阳性植株进行PCR-Southern印记杂交检测,其中8株为阳性植株。