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背景和目的：特应性皮炎(atopic dermatitis, AD)是一种与遗传过敏素质有关的特发性皮肤炎症性疾病,以不同程度的瘙痒、多形性皮损并有渗出性倾向为特点,严重影响患者的生活质量和工作情况。AD的病因比较复杂,发病机制尚不完全清楚,近年来认为皮肤屏障功能缺陷与AD的发病有很大的关系。表皮分化过程中涉及的相关蛋白：中间丝聚合蛋白(filaggrin, FLG)、兜甲蛋白(loricrin, LOR)及外皮蛋白(involucrin,INV),参与形成稳定的角质化蛋白壳膜,即角化包膜(cornified envelope,CE),它可以促进表皮的分化,也是抵御外环境物理刺激的主要屏障；在颗粒层及角质层细胞间隙中表达的激肽释放酶相关的肽酶,如组织激肽释放酶7(Kallikrein7,KLK7),具有裂解角桥粒和桥黏素I的作用,所以能够调节角质层的脱落。这几种蛋白对于维持皮肤的屏障功能都具有重要的作用。蛋白壳膜不仅在正常皮肤外部屏障功能起重要作用,而且对于角化上皮的形成也起重要作用。先前的研究证明了屏障的破坏会立即刺激脂质和DNA的合成,导致表皮增生。本实验通过测定水杨酸对C57BL/6J小鼠受损表皮的经皮水分丢失量(TEWL)恢复的作用,及对表皮分化相关蛋白INV、LOR、FLG及KLK7的影响,探讨水杨酸对表皮屏障功能的作用,从而为临床上水杨酸治疗AD提供实验依据。方法：将C57BL/6J小鼠分成4组(1%水杨酸组、3%水杨酸组、基质组和空白组),用胶带粘贴的方法造成C57BL/6J小鼠皮肤屏障受损模型,分别外用不同的药物(空白组不用任何药物),用皮肤生理测试仪测量粘贴前及粘贴后0h、2h、4h、6h、12h、24h、48h和72h的TEWL。并且取不同时间点小鼠的皮损组织分别用Real-TimePCR的方法和免疫组化的方法检测INV、LOR、FLG和KLK7四种蛋白的表达情况。其中TEWL的结果采用单因素方差分析的方法,结果用均值±标准差的形式表示,所有P值均为双侧检验结果,以P<0.05为差异有统计学意义。结果：1.水杨酸对小鼠的TEWL的影响：皮肤屏障受损后,外用3%水杨酸乳膏组的TEWL下降的最明显,其次为外用1%水杨酸乳膏组,之后为基质组,空白组的TEWL下降的最不明显,外用3%水杨酸乳膏组在4h、6h、12h、24h和48h时的TEWL与1%水杨酸乳膏组、基质组、空白组相比差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),外用1%水杨酸乳膏组与基质组TEWL比较接近,差异无统计学意义(P>0.05),外用1%水杨酸乳膏组和基质组在4h、6h、12h、24h和48h时与空白组相比差异有统计学意义(P<0.05)。基质组在4h、6h、12h和24h时与空白组相比差异有统计学意义(P<0.05)。其中外用3%水杨酸乳膏组在6h、12h和24h时作用最明显。2.皮肤屏障修复率：外用1%水杨酸乳膏组在屏障破坏后2h、4h、6h、12h、24h、48h和72h的皮肤屏障修复率分别是27.50%、44.80%、59.47%、73.47%、85.15%、90.71%、95.41%。外用3%水杨酸乳膏组在屏障破坏后2h、4h、6h、12h、24h、48h和72h的皮肤屏障修复率分别是35%、62.34%、83.48%、90.84%、96.80%、96.67%、96.70%。外用基质组在屏障破坏后2h、4h、6h、2h、4h、48h和72h的皮肤屏障修复率分别是30.17%、47.88%、62.82%、73.11%、82.10%、87.51%、94.05%。空白组在屏障破坏后2h、4h、6h、12h、24h、48h和72h的皮肤屏障修复率分别是20.99%、37.74%、48.08%、58.71%、74.62%、83.60%、93.63%。外用3%水杨酸乳膏组在2h、4h、6h、12h、24h和48h皮肤屏障修复率高于1%水杨酸乳膏组、基质组和空白组,差异有统计学意义(P<0.05)。外用1%水杨酸乳膏组在4h、6h、12h和24h时皮肤屏障修复率高于空白组,差异有统计学意义(P<0.05)。基质组的皮肤屏障修复率4h、6h、12h和24h时高于空白组,差异有统计学意义(P<0.05)。基质组和1%水杨酸乳膏组皮肤屏障修复率比较相近,差异无统计学意义(P>0.05)。3.Real-Time PCR的方法检测水杨酸对小鼠受损皮肤中INV、LOR、FLG和KLK7的表达的影响：INV、LOR和FLG这三种蛋白在6h、12h和24h时mRNA的表达均为外用3%水杨酸乳膏组高于1%水杨酸乳膏组、基质组和空白组,差异均有统计学意义(P<0.05)。INV、LOR和FLG这三种蛋白在6h、12h和24h时1%水杨酸乳膏组mRNA的表达高于基质组和空白组,差异均有统计学意义(P<0.05)。基质组与空白组在各个时间点的mRNA的表达相似,差异无统计学意义(P>0.05)。INV、LOR和FLG这三种蛋白均为3%水杨酸乳膏组在12h时mRNA表达最明显。在6h、12h和24h时KLK7mRNA表达均为外用3%水杨酸乳膏组低于1%水杨酸乳膏组、基质组和空白组,差异均有统计学意义(P<0.05)。6h、12h和24h时1%水杨酸乳膏组KLK7mRNA的表达低于基质组和空白组,差异具有统计学意义(P<0.05)。基质组与空白组在各个时间点的mRNA的表达相似,差异无统计学意义(P>0.05)。3%水杨酸乳膏组klk7mRNA在12h时表达最不明显。4.免疫组化方法检测水杨酸对INV、LOR、FLG、KLK7的表达的影响：12h时3%水杨酸乳膏组INV、LOR和FLG的表达高于基质组和空白组,差异有统计学意义(P<0.05)。12h时基质组和空白组的INV、LOR和FLG的表达相似,差异无统计学意义(P>0.05)。12h时外用3%水杨酸乳膏组KLK7的表达低于基质组和空白组,差异有统计学意义(P<0.05)。12h时基质组KLK7的表达与空白组相似,差异无统计学意义(P>0.05)。结论：1、低浓度的水杨酸乳膏和基质均具有减少屏障受损的皮肤的TEWL的作用,其中水杨酸乳膏减少TEWL的作用强于基质,而3%水杨酸乳膏作用最强,减少TEWL的效果最好。2、低浓度的水杨酸乳膏具有促进INV、LOR和FLG的mRNA和蛋白的表达的作用,能够增加角质层的FLG、LOR和INV蛋白含量,同时能够抑制KLK7mRNA和蛋白的表达,减少角质层的KLK7蛋白含量,从而能够增加角质层的水合作用,使角质层的修复增快,进而加快破坏的皮肤屏障的恢复速度。其中3%水杨酸乳膏的这种作用最明显,效果最好。这也为临床用低浓度的水杨酸乳膏治疗皮肤屏障破坏的疾病提供了理论依据。