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背景冠心病（coronary heart disease,CHD）是一种严重危害人类健康的心血管病,动脉粥样硬化是其主要的病理基础。目前的研究认为,该病与糖、脂代谢紊乱、高血压等各种危险因素的作用下,氧化应激参与血管的长期慢性炎症。动脉粥样硬化早期,外周血中的单核细胞聚集、黏附到血管内皮细胞表面,然后穿过内皮细胞层,迁入内皮下间隙转变为巨噬细胞并吞噬氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）后形成泡沫细胞,泡沫细胞的形成是动脉粥样硬化发生、发展的关键环节。因此,单核细胞是动脉粥样病变过程中的重要靶细胞。近年来国内外的研究发现瞬时受体电位通道（transient receptor potential channel,TRPchannel）是一类位于细胞膜上的离子通道超家族,是广泛分布于心血管系统,是一类对钙、钠等多种离子通透的阳离子通道。依据TRP序列同源性可将哺乳动物中的TRP离子通道分为7个亚家族即TRPC、TRPM、TRPV、TRPA、TRPML、TRPP和TRPN。其功能表达与动脉粥样硬化形成有密切联系,其中研究的较为广泛的为TRPV1,国外的部分等研究证实激活血管平滑肌细胞中的TRPV1,减少细胞对氧化低密度脂蛋白的摄取,减少平滑肌细胞的泡沫化,最终阻止动脉粥样硬化斑块的形成。而TRPA1常常与TRPV1共表达,胞浆内Ca2+浓度的增高最终激活TRPV1通道是TRPA1与TRPV1异聚化通道感知刺激而作用的。那么直接激活TRPA1在动脉粥样硬化的形成中是否有着更为重要的作用?目前国内外研究发现单核细胞TRPA1参与了机体疼痛反应、炎症反应、氧化应激、血管张力等多种生理病理过程。那么,TRPA1在单核细胞参与动脉粥样硬化的形成中是否有重要意义,其表达与冠状动脉病变程度是否有关系?目前对此研究较少,其机制值得我们进一步深入研究。目的本实验中,我们分离、提取患者外周血单核细胞,观察TRPA1在冠心病组和非冠心病组患者单核细胞中蛋白表达及mRNA转录水平的变化,分析TRPA1mRNA在不同病变血管支数分组、不同Gensini积分组、高血压组与非高血压组、糖尿病组与非糖尿病组冠心病患者中表达的差异,分析单核细胞TRPA1 mRNA转录水平与BNP及冠脉病变Gensini积分的相关性。材料与方法本研究根据患者冠脉造影结果分为冠心病组和非冠心病组,通过收集病人外周血,分离并提取外周血单核细胞,采用流式细胞术鉴定提取的外周血单核细胞;Western Blotting、细胞免疫荧光检测单核细胞中TRPA1蛋白的表达;RT-PCR观察单核细胞中TRPA1 mRNA转录水平。根据冠状动脉病变血管支数将冠心病患者分为单支血管病变组、双支血管病变组及多支血管病变组;采用冠脉病变Gensini积分对冠脉血管狭窄程度定量分析,将冠心病患者分为Gensini积分<30分组、3060分组、>60分组。分析单核细胞TRPA1 mRNA在高血压组与非高血压组、糖尿病组与非糖尿病组、不同病变血管支数分组及不同Gensini积分组间表达的差异。通过Spearman相关性分析冠心病患者单核细胞TRPA1 mRNA表达水平与BNP及冠脉病变Gensini积分的关系。结果1、冠心病组和非冠心病组病人基线资料比较冠心病组患者39人,男性18人,女性21人,非冠心病组患者36人,男性18人,女性18人。冠心病组和非冠心病组病人在性别、年龄、吸烟、高血压、糖尿病、体重指数（BMI）、尿酸、血肌酐、甘油三酯、LDL-C、总胆固醇等基线资料差异无统计学意义。2、人外周血单核细胞流式鉴定采用密度梯度离心法分离外周血单核细胞,经流式细胞术鉴定,单核细胞纯度在86.1%。3、外周血单核细胞TRPA1基因在蛋白水平的检测Western blotting及细胞免疫荧光检测单核细胞TRPA1蛋白表达,冠心病组患者单核细胞TRPA1（1.524±0.426）在蛋白水平上表达高于非冠心病组（0.590±0.275）,差异具有统计学意义（P<0.01）。4、人外周血单核细胞TRPA1基因在mRNA水平的检测RT-PCR检测单核细胞TRPA1 m RNA表达,冠心病组患者TRPA1 mRNA表达明显高于非冠心病组,差异具有统计学意义（P<0.05）。5、不同病变血管支数的冠心病患者TRPA1 mRNA表达水平的比较多支血管病变组单核细胞TRPA1 mRNA表达（9.882±1.532）水平明显高于单支血管病变组（7.005±1.135,P<0.01）;双支血管病变组表达（9.790±1.1971）水平高于单支血管病变组（7.005±1.135,P<0.01）;多支血管病变组表达（9.882±1.532）与双支血管病变组表达（9.790±1.1971,P=0.871）间差异无统计学意义。6、不同冠脉病变Gensini积分冠心病患者TRPA1 mRNA表达水平的比较冠脉病变Gensini积分>60分组（11.837±0.855）及3060分组（10.657±0.659）单核细胞TRPA1/GAPDH mRNA表达水平均较<30分组（8.171±1.373）水平明显高,差异具有统计学意义（t=5.143,P<0.01;t=5.191,P<0.01）;积分>60分组（11.837±0.855）较3060分组（10.657±0.659）表达增加,差异具有统计学意义（t=2.736,P=0.019）。7、糖尿病组与非糖尿病组冠心病患者单核细胞TRPA1 mRNA表达水平的比较糖尿病组冠心病患者单核细胞TRPA1 mRNA表达（9.685±0.932）高于非糖尿病组冠心病患者（8.982±0.756）,差异具有统计学意义（P=0.0134）。8、高血压组与非高血压组冠心病患者单核细胞TRPA1 mRNA表达水平的比较高血压组冠心病患者单核细胞TRPA1 mRNA表达（9.812±1.180）高于非高血压组（8.740±1.586）,差异具有统计学意义（P=0.024）。9、冠心病患者单核细胞TRPA1 mRNA转录水平与患者血BNP间的相关性将冠心病患者外周血单核细胞TRPA1 mRNA表达水平与BNP做Spearman相关性分析,结果显示两者呈低度正相关,r=0.342,P=0.033。10、冠心病患者外周血单核细胞TRPA1 mRNA表达水平与冠脉病变Gensini积分的关系将冠心病患者外周血单核细胞TRPA1 mRNA表达水平与冠脉病变Gensini积分做Spearman相关性分析,结果显示两者呈显著正相关,r=0.964,P<0.01。结论1、冠心病组患者单核细胞TRPA1在蛋白及m RNA转录水平高于非冠心病组,随着冠脉病变程度的加重,单核细胞TRPA1 mRNA表达增加,可作为预测冠脉病变程度的一项新的检测手段。2、冠心病患者合并有糖尿病或者高血压等危险因素时,单核细胞TRPA1mRNA转录水平增高。3、冠心病患者单核细胞TRPA1 mRNA表达水平与BNP水平呈正相关,可作为预测冠心病患者远期预后的一项检测指标。