【摘 要】
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白细胞粘附缺陷病(BovineLeukocyteAdhesionDeficiency,BLAD)是发生在荷斯坦牛群中的一种遗传性免疫缺陷病,受常染色体上单个隐性基因控制,是近几十年来奶牛育种中影响严重的疾
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白细胞粘附缺陷病(BovineLeukocyteAdhesionDeficiency,BLAD)是发生在荷斯坦牛群中的一种遗传性免疫缺陷病,受常染色体上单个隐性基因控制,是近几十年来奶牛育种中影响严重的疾病之一。患病牛主要表现为重复性感染和持续性嗜中性粒细胞数增多,患病牛犊发生早期死亡。致病机理为白细胞表面β2整合素表达缺陷,其分子遗传学基础是CD18基因编码区的第383位的腺嘌呤(A)突变为鸟嘌呤(G),导致128位天门冬氨酸(D)被甘氨酸(G)所取代。为准确诊断患病牛(BLAD)和携带者(BL),减少其为奶牛育种造成的经济损失,我们有必要建立一种快速、准确、有效地BLAD的检测方法。
本研究根据BLAD患病牛CD18基因编码区序列第383位点的A/G突变,从而使TaqⅠ限制性酶切位点消失的原理,建立了一种准确检测奶牛BLAD的PCR-RFLP方法。针对A383G突变位点设计了一对引物,特异性扩增奶牛CD18基因含有上述点突变的片段,长度为324bp。经限制性内切酶TaqⅠ酶切后,正常个体产生193bp和131bp的DNA条带,而携带者产生193bp、131bp和324bp的DNA条带,纯合隐性个体仍为324bp。应用该PCR-RFLP方法对116个中国荷斯坦奶牛进行了BLAD基因检测,其中包括48头母牛和68头公牛,共检测出2头BLAD携带者公牛,8头BLAD携带者母牛,没有发现纯合隐性突变基因个体。
基于以上结论,根据我国国情,我们对今后奶牛育种工作提出了一些建议。在奶牛育种工作中,应对荷斯坦牛有计划、有重点的进行BLAD检测,尤其是对于进入AI体系前的青年公牛,避免杂合个体进入育种体系,交配时产生BLAD患病个体。
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