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Cited2是调节着床后胚胎(胎儿)正常发育的转录辅助因子之一。目前,关于Cited2在卵母细胞成熟及早期胚胎发育过程中的作用未见报道,本研究旨在探索Cited2在卵母细胞成熟和早期胚胎发育过程中的作用。蛋白表达分析结果表明:Cited2蛋白主要表达于生长卵泡中。随后,通过对GV、GVBD. MI和Mil阶段的卵母细胞进行Cited2基因表达分析,研究其在卵母细胞成熟过程中的表达情况。结果表明:Cited2mRNA水平在卵母细胞成熟过程中基本保持不变;Cited2蛋白在小鼠GV期卵母细胞中表达量较高并且主要定位于生发泡中,而在小鼠MⅡ期卵母细胞中表达最低并弥散于胞质中。相对于发育潜力高的SN型(surrounded nucleolus,染色质凝聚于核仁周围成环状)GV期卵母细胞,Cited2蛋白在发育潜力低的NSN (non surrounded nucleolus,染色质松散)型GV期卵母细胞中表达更高。此外,Cited2蛋白水平在发育潜力低(形态异常)的小鼠GV期卵母细胞中显著高于发育潜力高(形态正常)的GV期卵母细胞,在体外老化的小鼠卵母细胞显著高于未老化的卵母细胞。随后,通过注射siRNA减少GV期卵母细胞中Cited2蛋白水平,加速了卵母细胞核成熟;而注射GFP-Cited2mRNA升高卵母细胞中Cited2蛋白水平,则抑制了卵母细胞GVBD的发生和极体排出。同时,Cited2基因在(1-、2-、4-和8-细胞)卵裂期胚胎、桑葚胚、囊胚和孵化囊胚各发育阶段胚胎中的表达量也逐渐降低。通过注射GFP-Cited2mRNA升高小鼠原核期胚胎的Cited2水平将会阻滞胚胎后期发育,主要表现为2-细胞期胚胎发育阻滞。RT-PCR检测发现p21waf/cip1mRNA水平在Cited2基因超表达的小鼠胚胎中显著高于对照组胚胎。以上小鼠研究结果表明:Cited2水平和小鼠卵母细胞发育质量相关。随后,本实验探讨Cited2的水平过高是否也会影响人和家畜的卵母细胞质量。卵母细胞老化是影响家畜卵母细胞质量和发育潜力的重要原因之一。通过RT-PCR检测,本研究发现Cited2水平在体外老化的猪卵母细胞中显著升高。随后,通过H2O2和防线菌酮(CHX)处理分别升高和降低猪卵母细胞胞内活性氧物质(ROS)水平,发现ROS水平升高是猪卵细胞老化和碎裂的原因之一。随后,RT-PCR分析表明ROS水平升高促进老化猪卵母细胞中Cited2、PPARy和bim的表达。现有研究表明:卵丘细胞中相关基因的表达水平能够在一定程度上反映胚胎的发育潜力,因此本实验就卵丘细胞中Cited2水平利人胚胎发育潜力的关系进行研究。蛋白表达分析结果表明:病人卵丘细胞中的Cited2蛋白水平各不相同。本研究将卵丘细胞中Cited2水平在整体均值以上的IVF病人归入Cited2高表达组,均值以下则归入低表达组。随后,按分组统计IVF病人的临床数据和胚胎数据。在Cited2高表达组病人中,这些病人在IVF周期中获取的卵母细胞表现出较低的受精率、优质胚胎率、着床率和妊娠率。此外,Cited2高表达组病人血清中基础卵泡刺激激素(FSH)水平明显下降,其卵丘细胞表现出较高的活性Caspase-3表达水平。定量RT-PCR分析表明,Cited2高表达组病人卵丘细胞中葡萄糖代谢相关基因(PCK1)和孕酮受体(PR)基因的表达及胞内葡萄糖水平也明显升高。对于ICSI病人,卵丘细胞中Cited2蛋白水平升高也会导致胚胎发育潜力下降。综上,我们得到以下结论:1) Cited2水平过高会抑制小鼠卵母细胞核成熟和早期胚胎发育。2) Cited2水平升高与卵母细胞发育潜力下降相关。3)人卵丘细胞中Cited2水平过高与受精后胚胎发育潜力下降相关。本研究首次发现了Cited2基因在小鼠卵母细胞成熟和早期胚胎发育过程中的表达规律和作用,以及Cited2水平升高与卵母细胞和胚胎发育潜力下降的关系。丰富了哺乳动物的卵母细胞成熟和早期胚胎发育理论,为人胚胎发育潜力预测提供新的理论依据。