论文部分内容阅读
第一部分 大鼠及人肝脏枯否细胞的分离纯化和培养 目的: 改进大鼠肝枯否细胞(kupffer cell,KC)分离、纯化和培养技术,探讨从人体肝脏手术标本中分离、纯化和培养枯否细胞的可行有效方法,以便进一步研究人体枯否细胞的生物学功能。 方法: 24只SD大鼠肝脏及6例人体肝脏手术标本用于本实验。大鼠肝脏通过门静脉、人体肝组织通过肝静脉灌注预灌流液,灌注后肝脏标本采用离体胶原酶灌注消化获得细胞悬液,然后通过差速离心去除细胞悬液中的肝实质细胞,获得富含KC的肝非实质细胞。改传统PBS重悬肝非实质细胞为25%percoll重悬,从而形成新percoll梯度为:PBS、含肝非实质细胞的25%percoll、50%percoll,然后通过不连续密度梯度离心分离获得枯否细胞,最后选择性贴壁进一步纯化。应用吞噬功能实验对KC进行鉴定,台盼蓝拒染实验判定细胞活力。 结果: 最终获得的枯否细胞的产量分别为:大鼠3.1±0.5×10~6/g肝脏,人体肝脏组织为2.3±0.4×10~6/g肝脏,细胞活力和纯度均达90%。 结论: