【摘 要】
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目的：
旨在建立RXRa的高效原核表达系统,为进一步深入研究RXRa奠定基础。
方法：
提取人肝组织总RNA,RT-PCR扩增RXRa的cDNA。将其克隆入原核表达载体pETDuet-1,
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目的：
旨在建立RXRa的高效原核表达系统,为进一步深入研究RXRa奠定基础。
方法：
提取人肝组织总RNA,RT-PCR扩增RXRa的cDNA。将其克隆入原核表达载体pETDuet-1,构建重组表达载体pETDuet-1/RXRa。将已构建好的表达载体pETDuet-1/RXRa重组质粒转化大肠杆菌BL21,异丙基硫代-8-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,Western Blotting鉴定表达产物。
结果：
1.重组载体pETDuet-1/RXRa经限制性核酸内切酶BglⅡ和AatⅡ双酶切鉴定,得到符合预期大小的核酸片段,经测序正确。
2.SDS-PAGE电泳可见与预期大小相符的蛋白条带,Western Blotting证实该条带即为RXRa。
3.对重组质粒pETDuet-1/RXRa在BL21菌株的表达效率进行评价,目的蛋白占菌体总蛋白的百分比为65.8％。
结论：
成功建立了pETDuet-1/RXRa的高效表达系统。
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